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仔猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株的构建

付海兵

   仔猪水肿病是由产Vero细胞毒素大肠杆菌(VTEC)引起的致死性传染病,能引起断奶仔猪四肢麻痹、步态蹒跚、痉挛和昏迷等神经症状,死亡率很高。剖检可见胃壁和肠系膜水肿,因此称之为“水肿病”。随着近几十年的深入研究,人们对水肿病的致病机理有了比较详细的了解,明确了仔猪水肿病的发生与产Vero细胞毒素大肠杆菌的两个致病因子——F18ab(F107)菌毛与志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)密切相关。其中SLT-Ⅱe起主要的毒力作用。 本实验应用定点突变技术将SLT-Ⅱe基因第167位谷氨酸和第170位精氨酸分别突变为谷氨酰胺和亮氨酸,再通过同源重组技术,利用自杀质粒pCVD442将突变后的SLT-Ⅱe~*基因重组到野生的大肠杆菌O_(139)中,替换原有的SLT-Ⅱe基因,构建出一株基因突变菌株。用4-6周龄清洁级昆明鼠和Vero细胞对突变菌株进行毒力检测,实验结果表明,突变菌株对小鼠肠胃等组织的损伤明显轻于野生株,而对Vero细胞的毒力可降至野生株的1/500。通过基因突变构建弱毒或无毒菌株,将对仔猪水肿病口服疫苗的研制提供技术保障和物质基础。……   
[关键词]:仔猪水肿病;志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe);Vero细胞毒素;同源重组;定点突变
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2007年