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银杏营养贮藏蛋白质的分离鉴定及特性研究

郭红彦

   本文以银杏(Ginkgo biloba L.)不同生长时期韧皮部薄壁组织超微结构的解剖学研究为突破口,应用酶标和胶体金免疫细胞定位技术,结合组织化学和生物化学分析,进行了银杏营养贮藏蛋白质的准确定位;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS-PAGE)进行了银杏营养贮藏蛋白质的组分分析、分离纯化和糖蛋白质特性研究,确定了银杏营养贮藏蛋白质的主要组分;阐明了银杏营养贮藏蛋白质季节性动态变化规律及与银杏生长发育的相关性;揭示了银杏营养贮藏蛋白质的形成、积累、降解的基本规律。这对于提高银杏氮素养分利用率,指导适时合理施肥以及今后采用转基因技术培育高氮素利用率的优良品种等方面均具有重大理论价值和实践意义。主要结论如下: 银杏营养贮藏蛋白质在枝条和根系的韧皮薄壁细胞、韧皮射线细胞、木射线、次生韧皮部与初生木质部之间的细胞中均有分布。但以韧皮薄壁细胞的液泡最为丰富。银杏韧皮薄壁细胞内的营养贮藏蛋白质在细胞质内合成,由内质网膨大的槽库、质膜内折或高尔基体小泡发育形成贮藏蛋白质的液泡。液泡蛋白质主要以不定形块状、絮状、颗粒状和均一细沙状等四种形式存在。 银杏营养贮藏蛋白质主要存在于枝条的皮层和木质部中;当年生枝条含量高于二年生枝条,皮层的含量高于木质部;银杏营养贮藏蛋白质的动态变化分为积累和降解两个阶段,5月份随着新梢伸长及新生叶片的形成,新梢开始积累营养贮藏蛋白质,在生长季节贮藏蛋白质含量不断增加,在12月份含量达到最高,在整个越冬期间一直保持高含量水平,直到翌年春季芽萌发时,贮藏蛋白质迅速降解、转移再利用,满足新梢生长发育的要求,到4月14日枝条中贮藏蛋白质几乎完全降解。 银杏枝条贮藏蛋白质组分可分为高分子量、中分子量和低分子量三类;同一分子量的营养贮藏蛋白质对应不同的等电点,从蛋白质的分子量和等电点两方面确定以下成份为银杏的营养贮藏蛋白质:(36.4,5.56)(36.3,4.57)(36.1,5.35)(36.4,5.49)(36.2,6.46)(36.2,5.02)(36,6.33)(36,6.74)(36.1,4.62)(36.4,5.19)(36,6.2)(36,6.43)(32.3,5.15)(32.4,4.66)(32.1,6.6)(32.1,6.3)(32.2,4.74)(32,5.97)(32.1,6.45)(32,5.75)。银杏营养贮藏蛋白质具有典型的糖蛋白特性。 运用制备型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并制备了银杏32kDa和36kDa两种营养贮藏蛋白质抗原,分别四次免疫新西兰大白兔,采血提取抗血清后,双向琼脂免疫扩散试验检测,成功获得了银杏32kDa和36kDa两种营养贮藏蛋白质的多克隆抗体。间接酶标免疫光镜细胞化学定位和胶体金免疫电镜细胞化学定位均证明36kDa和32kDa蛋白质是银杏的主要营养贮藏蛋白质。……   
[关键词]:银杏;营养贮藏蛋白质;细胞学;电泳;免疫组织化学定位
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:南京林业大学2007年