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苯并芘肺内注射诱发大鼠肺肿瘤及绿茶的预防作用机制初步研究

顾其华

   目的:肺癌的发病率在工业化国家里持续居高不下,发展中国家的肺癌发病率仍在不断上升。因而人们转而注重肺癌的预防,希望通过化学预防策略降低肺癌的发病率。最佳的化学预防策略是通过日常饮食降低肺癌的发病风险。茶为全球最普遍的饮料之一,年消费量仅次于水,其中绿茶的防癌作用较好,有可能是最佳的肺癌预防饮料。但目前绿茶与肺癌的关系仍存在一定的争议,绿茶预防肺癌的机制尚未完全明确。另外,肺肿瘤动物模型是评价肺癌防治方案必不可少的工具,而目前所采用的肺癌裸鼠移植瘤模型以及采用致癌剂吸入、支气管内灌注、腹腔注射等方法构建的原发性肺肿瘤模型等均存在不同程度的不足。因此,本课题试以苯并芘油剂经皮穿刺肺内注射的方法建立大鼠肺肿瘤动物模型,并以此模型评价绿茶对肺癌的预防作用,在此基础上观察绿茶对大鼠肺肿瘤组织以及对苯并芘所致大鼠肺损伤的p53和Bcl-2基因表达的影响,以初步阐明绿茶预防肺癌的机制。方法:每次以含3,4-苯并芘2mg的苯并芘-玉米油混合剂0.2mL经皮肺穿刺注射于经戊巴比妥钠麻醉后的SD大鼠右肺,每2周处理1次,共4次。并以纯玉米油肺内注射4次作为阴性对照,苯并芘-玉米油皮下注射处理2次作为阳性对照。观察大鼠肿瘤的发生情况。在绿茶预防肺肿瘤的实验中,以3,4-苯并芘油剂经皮穿刺肺内注射构建大鼠原发性肺肿瘤模型,并以1%的绿茶作为大鼠的唯一饮料干预处理,对照组以水为唯一饮料,观察绿茶处理对大鼠成瘤率的影响,并以原位杂交和免疫组织化学方法检测绿茶对大鼠肺肿瘤组织p53和Bcl-2基因表达的影响。在此基础上,进一步采用原位杂交和免疫组织化学方法观察绿茶干预处理对肺内注射3,4-苯并芘油剂后第1周、第4周、第8周及第16周大鼠肺组织p53和Bcl-2基因表达的影响。结果:所有接受玉米油肺内注射的大鼠一年内均未发生肿瘤;皮下注射组局部恶性肿瘤发生率达100%,平均晚期肿瘤摘除时间为15.83周,中位时间为16周;苯并芘-玉米油肺内注射组大鼠一年内肺部恶性肿瘤发生率为70%左右,平均晚期肿瘤摘除时间为31.54周,中位时间为30周,苯并芘肺内注射较皮下注射更难以形成肿瘤。1%的绿茶使大鼠肺恶性肿瘤发生率下降为30%,绿茶干预组大鼠肺肿瘤组织p53表达上调、Bcl-2基因表达下调,且与对照组比较Bcl-2基因表达差异有统计学意义(P<0.05)。肺内注射3,4-苯并芘油剂后第1周、第4周、第8周及第16周大鼠肺、支气管上皮细胞、粘膜下层细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞以及肺间质细胞等组织p53和Bcl-2基因均呈过量表达,但绿茶对苯并芘处理后大鼠各个时期肺组织的p53和Bcl-2基因表达均有影响,上调p53表达,下调Bcl-2表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:3,4-苯并芘油剂大鼠肺内注射是一种简便可靠的肺肿瘤模型构建方法。绿茶对苯并芘所致的肺恶性肿瘤具有明显的预防作用,上调p53和下调Bcl-2的表达是绿茶预防肺癌的重要机制。此外,肺自身具有较强的肿瘤防卫能力,绿茶很有可能通过另一种机制即通过调节肺“防卫细胞”的功能预防肺癌的发生。……   
[关键词]:肺肿瘤;大鼠;动物模型;绿茶;化学预防
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中南大学2007年