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玉米抗甘蔗花叶病毒功能候补基因SCMV Ⅰ-C_2的转化研究

赵文亮

   本文以玉米抗甘蔗花叶病毒功能候补基因SCMVⅠ-C_2和玉米表达启动子构建的重组质粒为载体,应用农杆菌介导法转化超甜玉米幼胚及愈伤组织,成功获得了转基因植株,同时研究了根癌农杆菌浓度、共培养时间与温度对玉米愈伤组织转化率的影响。主要研究结果如下: 1.在25℃条件下,分别以0.2、0.6、1.0、1.4的原始菌液浓度(0D600值),以稀释后的菌体浓度为原始浓度的0.3、0.6、0.9倍浸染玉米愈伤组织5min,然后在22℃下进行共培养、恢复性培养和抗性愈伤组织筛选等过程,发现原菌液浓度在OD600值为0.6,稀释2倍后转化,转化效率(抗性愈伤形成率)最高。 2.在25℃条件下,在原菌液浓度(0D600值)为0.6、稀释2倍后转化时,分别浸染玉米愈伤组织2min、5min、lOmin、15min,然后在22℃下进行共培养、恢复性培养和抗性愈伤组织筛选等过程,发现在原菌液浓度(0D600值)为0.6、稀释2倍后转化,浸染时间为5min时,转化效率(抗性愈伤形成率)最高。 3.在原菌液浓度(OD600值)为0.6、稀释2倍后浸染玉米愈伤组织5min,以19℃、22℃、25℃分别进行1天、3天、5天时间的共培养,分别统计幼胚抗性愈伤组织的形成率,结果显示,在原菌液浓度(oD600值)为0.6,稀释2倍后浸染玉米愈伤组织5min,在22℃共培养3天的条件下,转化效率(抗性愈伤形成率)最高。 4.由根癌农杆菌介导外源玉米抗甘蔗花叶病毒功能候补基因SCMVⅠ-C_2转化玉米愈伤组织获得的转基因玉米植株,经PCR鉴定、RT-PCR检测证明外源SCMVⅠ-C_2基因成功转入玉米基因组中。……   
[关键词]:甜玉米;农杆菌;转化;PCR检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:暨南大学2007年