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陕西省牛轮状病毒的分离鉴定及其VP7基因的遗传变异分析

姜向阳

   牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV)又称犊牛腹泻病毒(Calf diarrhea virus),属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),为双股RNA病毒,共分11个节段。轮状病毒感染多发生在1月龄以内的犊牛,其临床症状表现为精神沉郁、食欲废绝、水样腹泻、严重脱水和酸中毒,将近一半的新生犊牛腹泻与轮状病毒感染有关。 VP7是病毒外衣壳的一种N-联低聚甘露糖糖蛋白,由病毒第7、8或9节段(不同的毒株节段不同)编码,是轮状病毒主要的保护性抗原,组成病毒外衣壳的光滑部分,并决定病毒的G型。VP7也是一种Ca2+结合蛋白,与病毒粒子的形成和稳定有关。VP7重组蛋白和VP7的合成肽(275~295位氨基酸)可产生保护动物避免RV感染的中和抗体。本研究从陕西省西安市一患腹泻的犊牛群中分离到一株轮状病毒,并对其主要结构基因VP7进行了克隆和遗传变异分析,结果如下: 1.根据轮状病毒VP7基因不同的血清型,设计了3对不同的特异性引物,对陕西省西安市疑似牛轮状病毒感染的犊牛腹泻粪样进行RT-PCR扩增,结果获得了500 bp的目的条带,证实陕西省犊牛存在轮状病毒感染,病原为BRV G6血清型。 2.采用MA104细胞从PCR鉴定RV阳性的病料中进行病毒分离,病料在MA104细胞上盲传4代后出现细胞病变(CPE),CPE主要表现为细胞脱落,出现拉网现象,部分出现死亡。病毒第8代细胞培养物的TCID50为105.20/20μL。病毒核酸经PAGE实验,核酸呈4∶2∶3∶2型分布,属于典型的A群轮状病毒。对分离株的VP7基因进行扩增,获得长度为1 062 bp的RV VP7基因,证实分离到了牛轮状病毒。 3.运用DNAStar分析软件对RV分离株与GenBank中收录的牛轮状病毒参考株NCDV,疫苗株WC3,山东分离株CHLY等毒株的VP7基因全序列进行同源性分析,结果发现,RV分离株与牛轮状病毒参考株NCDV的VP7核苷酸同源性达99.1%,与疫苗株WC3的核苷酸同源性为95.6%,与山东分离株CHLY核苷酸同源性为97.7%。而与其它血清型同源性较低,在68%~70%之间。分离毒VP7基因变异主要表现为核苷酸中碱基的替换,主要在第58、97、302、458、486、699、742、882和930处发生变异。试验表明,牛轮状病毒在同一血清型中VP7基因核苷酸变异较小,而不同的血清型间存在较大的基因变异。 本研究从陕西省分离到了一株牛轮状病毒,建立了牛轮状病毒RT-PCR诊断方法,对牛轮状病毒陕西分离株的VP7基因的遗传变异进行了分析,为我国牛轮状病毒的分子流行病学提供了新的资料。……   
[关键词]:轮状病毒;分离鉴定;VP7基因;遗传变异;犊牛
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2007年