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药物与血清白蛋白的相互作用及蛋白质新分析方法的研究

赵锦

   血清白蛋白作为一种储存和运输蛋白,是血浆中含量最丰富的蛋白,它能和许多内源性或外源性物质结合。研究其与药物分子的相互作用,不仅对于阐明药物的运输与代谢过程非常有意义,而且对于阐明药物机理,药物动力学和药物毒性非常重要。荧光技术是研究血清白蛋白与药物相互作用的重要手段。 蛋白质是生命活动的基础物质,也是构成人体新生组织,维持人体健康的重要组成成分。奶产品中蛋白质的含量直接决定其营养价值和质量,因此,研究奶产品中蛋白质的含量成为食品领域中的一个热门话题。毛细管电泳(CE)以其分离效率高、分析时间短、样品需要量少、操作费用低等优点,日益成为一种高效分离分析方法,广泛用于蛋白质的分析。在查阅文献的基础上,本论文进行了以下方面的研究工作: (1)采用荧光光谱法(FS)和紫外光谱法(UV)研究了士的宁与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,确定了静态猝灭和非辐射能量转移是导致士的宁对BSA荧光猝灭的两大原因,求得了士的宁对BSA的表观结合常数KA分别为3.72×10~3(27℃),4.27×10~4(37℃),4.47×10~3(47℃),结合位点数n为1.01±0.03及二者间的结合距离r为3.795nm,能量转移效率E为0.0338。同时利用同步荧光光谱探讨了士的宁对牛血清白蛋白构象的影响。根据热力学函数确定了士的宁与BSA之间主要是靠疏水力相互作用,而且它们之间的结合是自发进行的。 (2)建立了非竞争性毛细管电泳免疫法测定牛初乳制品中免疫球蛋白G(IgG)含量的新方法。该方法采用FITC-PrG作为荧光探针通过非共价键结合的方式来标记单克隆抗体,它们形成FITC-PrG-Ab,FITC-PrG-Ab在适宜的温育条件下与IgG的Fc区结合形成三明治式免疫复合物FITC-PrG-Ab-IgG,利用FITC-PrG-Ab-IgG的荧光信号作为定量分析的依据。以27cm×50μm毛细管作为分离柱,50mmol/L硼酸+65g/L聚乙二醇(PEG)20000pH=8.92为分离缓冲液,5mmol/L硼酸pH=8.74为样品缓冲液,分离温度25℃,分离电压30kV,利用激光诱导荧光检测器对含有IgG的牛初乳制品进行分离检测。该方法的线性范围为:1~5mg/L,最低检出限为0.1mg/L。该方法简单、快速,适合牛初乳制品中IgG含量的快速测定。 (3)建立了毛细管电泳法测定乳制品中α-乳白蛋白(α-Lac)的新方法。以77cm×50μm毛细管作为分离柱,0.5mol/L硼酸,pH=8.35为分离缓冲液,以0.05mol/L或0.1mol/L醋酸为样品提取介质,分离温度25℃,分离电压22kV,利用紫外检测器在214nm处对含有α-Lac的乳制品进行分离检测。方法线性范围为:50~2000mg/L,最低检出限为:5mg/L。本方法准确、灵敏,适于乳制品中α-Lac的检测。……   
[关键词]:荧光光谱法;士的宁;牛血清白蛋白;毛细管电泳免疫分析;免疫球蛋白G;α-乳白蛋白
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北农业大学2007年