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扇贝多肽调节ROS/p38MAPK/caspase-3通路抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

李金莲

   目的建立UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型,从活性氧(ROS)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法采用正交实验设计,以流式细胞仪PI染色法测定细胞凋亡率,确立UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型。实验设计分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68 mmol·L~(-1)维生素C阳性对照组、UVA+5.69 mmol·L~(-1) PCF组、UVA+2.84mmol·L~(-1)PCF组、UVA+1.42 mmol·L~(-1)PCF组。以2,7-二氯氢化荧光素二酯(DCFH-DA)为荧光探针,检测PCF对UVA照射后细胞内ROS生成的影响;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;Hochest 33258荧光染色观察H_2O_2引起的细胞凋亡形态学改变及PCF对凋亡的影响:蛋白质印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK及c-fos蛋白表达;Real-Time PCR检测c-fos mRNA表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果正交实验结果表明,8J·cm~(-2) UVA照射HaCaT细胞后18 h为最佳凋亡模型;1.42~5.69 mmol·L~(-1)剂量范围内的PCF可明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡及细胞内活性氧的产生(P<0.05);PCF对H_2O_2引起的核固缩等细胞凋亡形态学改变有显著抑制作用;预先加入SB203580和Ac-DEVD-CHO可明显抑制UVA诱导的HaCaT细胞DNA Ladder的形成;1.42~5.69 mmol·L~(-1)剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制8J·cm~(-2) UVA引起的p38MAPK磷酸化、caspase-3的活化及c-fos mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论PCF可抑制8J·cm~(-2)UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机理与抑制UVA诱导的ROS产生、p38MAPK通路激活和caspase-3活化有关。……   
[关键词]:扇贝多肽(PCF);紫外线;ROS;p38MAPK;caspase-3
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:青岛大学2007年
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