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缝裂层孔菌抗肿瘤作用及作用机制的研究

郭军鹏

   缝裂层孔菌(Phellinus linteus,PL)俗称桑黄,属担子菌亚门,呈菌纲,多孔菌科。子实体入药,其味甘辛,无毒,能利五脏,软坚,排毒,止血和活血。近年来研究结果表明,PL中含有多糖、生物碱、黄酮、甾体和萜类等多种活性成分。本实验研究了缝裂层孔菌抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。实验共分四部分:第一部分,缝裂层孔菌的抗肿瘤作用;第二部分,缝裂层孔菌抑瘤协同增效作用试验;第三部分,缝裂层孔菌对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用试验;第四部分,缝裂层孔菌调节荷瘤小鼠免疫功能的机制研究。 第一部分,缝裂层孔菌的抗肿瘤作用。通过建立小鼠体内胃癌(MFC)、肝癌(HepA)、肉瘤(S_(180))和肺癌(Lewis)荷瘤模型,观察缝裂层孔菌三个剂量(2.0g/kg,1.0g/kg,0.5g/kg)的体内抑瘤作用。结果表明,三个剂量的缝裂层孔菌对MFC和HepA荷瘤小鼠的肿瘤生长,重复试验三次均具有抑制作用(P<0.05,P<0.01);高、中剂量的缝裂层孔菌对S_(180)荷瘤小鼠的肿瘤生长,重复试验三次具有抑制作用(P<0.05,P<0.01);高剂量缝裂层孔菌对Lewis肺癌的生长,有一定的抑制作用(P<0.05),但对肺肿瘤的转移无明显抑制作用(P>0.05)。通过MFC胃癌细胞的体外试验表明,缝裂层孔菌对MFC无直接杀伤作用。 第二部分,缝裂层孔菌与放化疗联合抗肿瘤的协同增效作用试验。小鼠右前肢腋下荷瘤细胞胃癌(MFC细胞株),随机分13组,即空白对照组,及单纯环磷酰胺(CTX)高、中和低3个剂量组(20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg),以及PL高、中和低3个剂量(2.0g/kg、1.0g/kg和0.5g/kg)分别与CTX 3个剂量联合给药组。空白对照组每日灌胃给予蒸馏水0.01mL/g;CTX为隔日腹腔注射;PL为每日灌胃给药,连续给药10d。停药次日处死小鼠,应用重量法观察各组荷瘤(胃癌)小鼠体重和瘤重的变化。小鼠右后肢胫骨外侧皮下荷瘤细胞肝癌(HepA细胞株),随机分5组,即空白对照组、单纯X线放疗组、PL 3个剂量分别与放疗联合治疗组。空白对照组每日灌胃给予蒸馏水0.01mL/g;PL为每日灌胃给药,连续14d;X线照射于PL给药第5天开始,每次照射0.5Gy,每同1次,共5次。PL停药后次日处死小鼠,应用重量法观察各组荷瘤(肝癌)小鼠体重和瘤重的变化。结果:单纯CTX 3个剂量和分别与PL 3个剂量联合给药各组荷瘤(胃癌)小鼠瘤重与空白组比较均明显降低(P<0.01);CTX和PL联合给药各组荷瘤(胃癌)小鼠瘤重与单纯同剂量CTX组比较均明显降低(P<0.05,P<0.01)。较空白对照组,单纯应用CTX 3个剂量组荷瘤(胃癌)小鼠体重均明显降低(P<0.05,P<0.01),CTX和PL联合给药各组荷瘤(胃癌)小鼠体重均无明显变化。单纯X线放疗和分别与PL高、中和低3个剂量联合应用各组荷瘤(肝癌)小鼠瘤重与空白对照组比较均明显降低(P<0.01),不同剂量PL和X线联合应用各组荷瘤(肝癌)小鼠瘤重与单纯X线放疗组比较均显著降低(P<0.05,P<0.01)。较空白对照组,单纯X线放疗组荷瘤(肝癌)小鼠体重明显降低(P<0.05),不同剂量PL和X线联合应用各组荷瘤(肝癌)小鼠体重均无明显变化。结果表明,缝裂层孔菌(2.0g/kg,1.0g/kg,0.5g/kg)分别与环磷酰胺(5mg/kg,10mg/kg,20mg/kg)联合应用以及与放疗合用可增强环磷酰胺及放疗的抗肿瘤作用,并可在体重增长方面减少化疗及放疗对小鼠的毒性作用,达到减毒增效的目的。 第三部分,缝裂层孔菌对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用试验。通过测定荷艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率、荷MFC胃癌小鼠胸腺指数及脾指数和巨噬细胞吞噬功能测定、荷HepA肝癌小鼠淋巴细胞转化实验并测定NK细胞活性、荷S_(180)肉瘤小鼠抗体形成细胞功能试验,探讨缝裂层孔菌对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果表明,缝裂层孔菌(0.5g/kg,1.0g/kg,2.0g/kg)和阳性药环磷酰胺(30mg/kg)重复试验二次均能延长荷艾氏腹水癌小鼠生存时间(P<0.001);缝裂层孔菌(2.0g/kg,1.0g/kg)能提高荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数(P<0.05)并增加巨噬细胞杀伤吞噬功能(P<0.05,P<0.01);缝裂层孔菌(2.0g/kg,1.0g/kg)能增强荷瘤小鼠T、B淋巴细胞转化功能(P<0.05)且高剂量的缝裂层孔菌能显著提高NK细胞的杀伤功能(P<0.01),缝裂层孔菌(2.0g/kg,1.0g/kg)能增加荷瘤小鼠抗体形成细胞的数量(P<0.01,P<0.001)。 第四部分,缝裂层孔菌调节荷瘤小鼠免疫功能的机制研究。采用HE染色方法观察荷MFC小鼠脾脏的形态变化,采用流式细胞仪检测荷MFC小鼠外周血和脾脏CD4~+、CD8~+T细胞比例及CD4~+/CD8~+T细胞比值的变化,采用ELASA方法测定荷Lewis肺癌小鼠血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6和IL-10,采用RT-PCR方法检测荷Lewis肺癌小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-10的mRNA的表达。结果表明,缝裂层孔菌(2.0g/kg,1.0g/kg,0.5g/kg)三个剂量小鼠脾脏生发中心均扩大,而且中心细胞增生活跃;缝裂层孔菌(2.0g/kg,1.0g/kg)高、中剂量作用的小鼠外周血和脾脏CD4~+明显增加(P<0.05),CD8~+变化不显著,CD4~+/CD8~+比值变化显著(P<0.05);缝裂层孔菌(2.0g/kg,1.0g/kg,0.5g/kg)血清IFN-γ和IL-2值较对照组明显增高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),缝裂层孔菌组(2.0g/kg,1.0g/kg)血清IL-6和IL-10值较对照组明显降低(P<0.05);缝裂层孔菌(1.0g/kg,2.0g/kg)显著促进了IFN-γmRNA的表达,而降低了IL-10 mRNA的表达。 上述实验表明,缝裂层孔菌具有抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用是通过调节机体的免疫功能来实现的。……   
[关键词]:缝裂层孔菌;抗肿瘤;免疫功能
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:长春中医药大学2007年