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绿原酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激作用的实验研究

雷龙涛

   背景及目的 糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)常见和严重的并发症,是目前引起糖尿病病人死亡的主要原因之一。研究表明糖尿病时体内产生过量的活性氧物质(ROS),同时抗氧化系统能力下降,这种氧化应激状态作为一原发和独立的因素在糖尿病多种并发症的发病过程中起到了不容忽视的作用。因此,抗氧化治疗自然而然地成为糖尿病并发症治疗的选择。绿原酸(CA)是一种普遍存在于植物界的抗氧化物质。本研究通过观察正常大鼠,糖尿病大鼠,绿原酸干预大鼠氧化应激指标以及一般指标的变化,以验证糖尿病时氧化应激状态的存在,并探讨绿原酸对糖尿病大鼠肾脏氧化及抗氧化系统的影响。 研究方法 1实验分组将36只健康雌性Wistar大鼠,体重200g-250g,随机分为正常对照组(N组)、糖尿病组(DM组)和绿原酸干预组(CA组)。 2动物模型制备将链脲佐菌素(STZ)临用时溶于0.1mmol/L柠檬酸-柠檬酸酸钠缓冲液(pH值4.2)中。大鼠禁食16小时后,DM组和CA组大鼠按60mg/kg单次腹腔注射STZ,N组腹腔注射0.1mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,注射量均为6ml/kg。24h后,采集大鼠尾静脉血用ACCU—CHEK Active血糖仪测定血糖值,以血糖(BG)高于16.7mmol/L作为糖尿病大鼠成模标准。 3实验干预每日上午9:00~10:00,CA组大鼠给以绿原酸10mg(溶于pH3.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液0.5ml中)腹腔注射,N组和DM组大鼠均给予等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液腹腔注射。每日下午6:00~7:00给DM组及CA组每只大鼠2个单位精蛋白锌胰岛素背部皮下注射。整个实验过程中所有大鼠均自由采食,饮水。 4标本采集实验第10周末,将大鼠单只置于代谢笼中,收集24h尿液,离心后-80℃保存,待测24小时尿白蛋白排泄率(UAER);取尾静脉血测血糖后,按3ml/kg体重腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠,然后处死大鼠,取肾脏。取皮质制作10%匀浆,备测SOD,GSH-PX和MDA;另取部分皮质约0.5×0.5×0.5cm~3大小放入10%福尔马林溶液中,备用制作病理切片。 5测定指标及方法血糖测定:采用ACCU—CHEK Active血糖仪测定;普通天平测量大鼠重量;分析天平测量肾脏重量;UAER测定:放射免疫法测定(中国原子能科学研究院同位素所);肾皮质SOD测定:比色法(南京建成生物工程研究所);肾皮质GSH-PX测定:羟胺法(南京建成生物工程研究所);肾皮质MDA含量测定:比色法(南京建成生物工程研究所)。 6病理切片制作普通HE染色作肾组织病理切片。 7统计学处理采用SPSS 10.0统计软件分析处理,结果均以均数±标准差((?)±s)表示,统计学处理用方差分析,q检验和t检验,以α=0.05为显著性检验水准,以P<0.05有统计学意义。 结果 1血糖、体重差和肾脏重量的比较与N组相比,DM组和CA组给以STZ后血糖明显升高,而DM组和CA组相互之间饲养前后组间差异均无统计学意义(P>0.05);与DM组相比,CA组体重差值较小,差异具有统计学意义(P<0.05),但比N组轻;与CA组比较,DM组肾脏重量明显变小,而比N组肾脏增重(P<0.05)。 2氧化应激指标及UAER结果比较与N组比较,CA组和DM组抗氧化酶SOD和GSH-PX活性减低而氧化应激产物MDA含量升高(P<0.05),UAER则有所增多(P<0.05)。与DM组比较,CA组抗氧化酶SOD和GSH-PX含量明显升高,而氧化应激产物MDA含量明显减少,UAER则明显减少(均P<0.05)。 3切片结果与正常组相比,DM组和CA组可见肾组织充血,而以CA组充血更明显;与CA组相比,DM组可见肾小球分叶明显,肾小管区可见蛋白管型形成。 结论 1糖尿病时机体氧化应激水平明显升高。 2绿原酸可改善糖尿病大鼠的体重、肾重变化,提高肾脏抗氧化能力,抑制氧化应激,减少尿白蛋白。……   
[关键词]:绿原酸;氧化应激;糖尿病肾病;大鼠
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:郑州大学2007年