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应用光纤生物传感器检测病原及其抗体的研究

魏华

   本研究以鼠疫耶尔森氏菌为主要对象,研究光纤生物传感器技术平台的建立,以及抗原和抗体检测体系的构建,旨在建立现场快速检测生物恐怖剂的可靠方法,以及实现对病原体及其抗体的高灵敏性检测。 完成光纤生物传感器FOB-3系统构成(与中科院上海光学精密机械研究所合作)。通过数据处理,系统稳定性评估以及优化实验条件,建立了FOB-3检测平台。在优化的条件下对鼠疫菌进行了灵敏度检测和特异性检测分析,并检测了39份动物脏器标本。在完成鼠疫菌检测分析的基础上,分别对炭疽芽孢杆菌及其芽孢,葡萄球菌肠毒素(SEB)进行了检测,并初步检测黄热病毒。确立了以IgG为媒介捕获鼠疫菌F1抗原检测F1抗体的免疫学方法。表达,纯化了F1抗原。确定了捕获表达的F1抗原检测F1抗体的最佳温度,浓度和时间。在最佳条件下,通过捕获包被法对鼠疫F1抗体进行了检测分析,并检测了35份兔血清样品。 通过优化实验条件,FOB-3检测抗原可在20 min左右获得最佳信号值。检测蛋白抗原的灵敏度可以达到50至100 ng/ml(F1抗原可检测到50 ng/ml,SEB的检测到100 ng/ml)。对于细菌繁殖体可检测到30-60CFU/ml(鼠疫耶尔森氏菌EV76株60 CFU/ml,炭疽芽孢杆菌sterne株30 CFU/ml),炭疽sterne株芽孢可检测到4×10~4CFU/ml。同时,鼠疫耶尔森氏菌特异性实验结果显示FOB-3可以从近缘或远源菌中特异性鉴别出该菌。对鼠疫耶尔森氏菌感染的动物标本检测结果证明FOB-3在实际检测中灵敏度为92.6%,特异性100%。应用捕获包被法在FOB-3上可以实现了对鼠疫菌F1抗体的灵敏检测(可检测到浓度为10 ng/ml的F1抗体)。检测16份鼠疫菌感染的血清均获得阳性信号,灵敏度达到100%,获得了比间接血凝实验更高的灵敏度。特异性为94.7%,总有效率为97.1%。 FOB-3实现了对一些病原微生物及其结构和代谢产物,以及鼠疫菌F1抗体的快速,灵敏和特异的检测。同时实验条件有待进一步优化,光纤质量和制作工艺有待提高。……   
[关键词]:抗体检测;倏逝波;鼠疫菌;光纤生物传感器;黄热病毒;FOB;精密机械;信号值;包被抗体;炭疽芽孢杆菌;抗原检测;人间鼠疫;生物活性分子
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国人民解放军军事医学科学院2007年