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人/禽流感病毒血凝素融合蛋白在大肠杆菌中的表达

韩轼奇

   研究目的:构建流感/禽流感及禽流感/流感血凝素融合蛋白的原核表达载体,并在E.coli JM109中表达,检测融合蛋白的生物学活性。 实验方法:从H1N1流感病毒接种10日龄的鸡胚尿囊液中以RT-PCR法获得特异性H1基因,以H1基因为模板经PCR反应获得特异性H1A1及H1A2基因,再从质粒pMD18-T/H5中经PCR法获得特异性H5A1及H5A2基因,经重叠延伸PCR(SOE PCR)法连接,构建重组基因H1A1H5A2及H5A1H1A2,分别以T4 DNA连接酶连接7ZTS原核表达载体构建重组质粒7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2。将二者转染E.coli JM109感受态细胞,经IPTG于37℃下诱导4小时,经超声波破碎收获包涵体蛋白。以12%SDS-PAGE电泳及Western blot实验检测,分析表达产物的抗原性。 实验结果:测序结果显示获得的H1A1 H5A2、H5A1H1A2基因序列正确,重组载体7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2酶切鉴定结果正确,12%SDS-PAGE电泳显示蛋白表达正确,Western blot检测中重组流感/禽流感血凝素蛋白可与anti-H1发生特异性结合;重组禽流感/流感血凝素体蛋白可与anti-H5特异性结合。 结论:成功获得了H1A1H5A2、H5A1H1A2基因,完成了原核表达载体7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2的构建,优化了的融合蛋白的表达条件,使流感/禽流感血凝素融合蛋白及禽流感/流感血凝素融合蛋白在大肠杆菌7ZTS系统中高效表达,验证了血凝素蛋白的抗原决定簇位于重链。……   
[关键词]:血凝素融合蛋白;7ZTS/H1A1H5A2;7ZTS/H5A1H1A
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:吉林大学2007年