手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

肽基脯氨酰同分异构酶Pin1在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组织中的表达及作用的研究

董卫红

   第一部分:宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组织中肽基脯氨酰同分异构酶Pin1的表达及与相关因子关系的研究 分题一:宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中肽基脯氨酰同分异构酶Pin1的表达 目的:探讨肽基脯氨酰同分异构酶(peptidy-prolyl cis/trans isomerase PPIase,简称Pin1)在宫颈癌及各级宫颈上皮内瘤变组织中的表达。 方法:运用RT-PCR和免疫组化法分别检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ)、Ⅱ级(CINⅡ)、Ⅰ级(CINⅠ)和正常宫颈组织中Pin1 mRNA和蛋白的表达。 结果:1.宫颈癌、CINⅢ、CINⅡ、CINⅠ和正常宫颈组织Pin1/actin mRNA的平均光密度比值分别为1.92±0.48,n=10;1.03±0.40,n=10;0.42±0.26,n=10;0.39±0.16,n=10;0.33±0.19,n=10。宫颈癌组的Pin1/actin比值明显高于其他各组,P<0.01;CINⅢ组高于CINⅡ、CINⅠ和正常组,P<0.05;CINⅡ、CINⅠ和正常组之间相比差异无统计学意义。 2.宫颈癌组Pin1免疫组化染色密度比值为175.50±15.44,n=41;CINⅢ组和CINⅡ组的Pin1染色密度比值分别为155.02±15.84,n=30;153.75±21.20,n=30,两组之间差异无显著性,CINⅡ+CINⅢ总密度比值为154.39±18.56;CINⅠ组Pin1染色密度比值为138.89±11.46 n=30,;正常宫颈组织Pin1密度比值为125.17±15.24,n=10。宫颈癌、CINⅡ+CINⅢ和CINⅠ之间差异有显著性,P<0.001。CINⅠ与正常宫颈组织之间差异无显著性,P=0.05。 结论:Pin1在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中明显高表达,其表达水平与病变程度有关。 分题二、宫颈癌组织中Pin1、Cyclin D1的表达及关系 目的:探讨宫颈癌组织中Pin1和Cyclin D1的表达及其相互关系。 方法:应用RT-PCR和免疫组化法分别检测宫颈癌组织中Pin1和Cyclin D1的mRNA和蛋白质的表达。 结果:1.宫颈癌组织中Pin1染色密度平均值为165.97±14.42,n=41,明显高于正常宫颈组织的染色密度(137.09±13.96,n=10),P<0.01。其中,Ⅱ期宫颈癌的染色密度值(170.96±13.60,n=30)明显高于Ⅰ期(163.05±13.81,n=11),P<0.05;有淋巴结转移组其值(173.59±12.47n=7,)高于无淋巴结转移组(164.40±14.67,n=34),P<0.05。不同组织类型和不同分化级别之间Pin1染色密度无差别。 2.宫颈癌和正常宫颈组织中Cyclin D1染色密度比值分别为126.72±12.96,n=41;124.23±13.04,n=10,差异无显著性。腺癌组Cyclin D1染色密度值为131.28±12.47,n=11,明显高于鳞癌组的125.04±12.93,n=30,P<0.05;其余各组之间差异无显著性。 3.15例宫颈癌组织中,有10例Pin1mRNA阳性,5例Cyclin D1mRNA阳性。在Pin1阳性病例中有3例Cyclin D1阳性,Pin1阴性病例中由2例Cyclin D1阳性。Pin1和Cyclin D1表达之间无明显相关性,P值为0.699。 结论:宫颈癌中组织Pin1表达明显增高,表达水平与期别和是否有淋巴结转移有关,与组织类型和分化级别无关。Cyclin D1的表达与正常组织无差异。宫颈癌中Pin1和Cyclin D1的表达无明显相关性。 分题三:宫颈上皮内瘤变组织中Pin1、p16INK4a、Ki—67的表达及关系 目的:了解宫颈上皮内瘤变组织中Pin1、p16INK4a、Ki-67、HPV-DNA的表达及关系。 方法:用免疫组化法分别检测宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ,n=30)、Ⅱ级(CINⅡ,n=30)、Ⅰ级(CINⅠ,n=30)和正常宫颈组织中(n=10)Pin1、p16INK4a、Ki-67蛋白的表达。 结果:1.CINⅢ组和CINⅡ组的Pin1染色密度比值分别为155.02±15.84;153.75±21.20,两组之间差异无显著性,CINⅡ+CINⅢ总密度比值为154.39±18.56;CINⅠ组Pin1染色密度比值为138.89±11.46;正常宫颈组Pin1染色密度比值为125.17±15.24;CINⅡ+CINⅢ组与CINⅠ组和正常对照组之间差异有显著性,P<0.05。 2.p16INK4a的表达在CIN组和正常对照组间及CIN组内的表达差异均有显著性,P值分别为0.018和0.025。Ki-67和HPV-DNA的表达在正常宫颈组织和CIN组之间有差异,P值分别为0.028、0.011,而CIN各组之间无差异。 3.p16INK4a阳性和阴性组其Pin1染色比值分别为151.20±19.56、135.52±12.38,P<0.001:Ki-67阳性和阴性组Pin1值分别为151.90±19.43、138.51±15.59,P<0.001;HPV-DNA阳性和阴性Pin1值分别为150.05±19.68、140.80±16.75,P=0.20。 结论:在宫颈上皮内瘤变组织中,Pin1表达呈不同程度升高,其表达水平与p16INK4a水平一致,也与Ki-67的表达相关。 第二部分:宫颈液基细胞涂片中Pin1的表达及意义 目的:了解Pin1在宫颈液基细胞涂片中的表达,探讨Pin1作为分子标记物诊断宫颈上皮内病变的价值。 方法:选择271例(HSIL67例、LSIL79例、ASC-US57例、ASC-H35例、AGC33例)液基细胞学存档涂片退色后进行Pin1免疫组化染色,比较各组Pin1阳性细胞数。结果以Pin1阳性细胞比值(阳性细胞数/1000细胞)表示。 结果:1.HSIL、LSIL、ASC-US、ASC-H和AGC组Pin1免疫组化阳性细胞比值的中位数和四分位间距分别为3.1,4.7;1.4,1.7;1.0,0.95;1.4,1.0;1.6,1.3。HSIL组Pin1阳性细胞中位数明显高于其他各组,P<0.01。而LSIL、ASC-US、ASC-H和AGC四组之间差异无显著性。 2.慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和SCC各组Pin1阳性细胞比值的中位数和四分位间距分别为1.35,1.2;1.2,1.78;4.2,2.3;8.6,3.9;8.5,3.9。CINⅢ和SCC的Pin1阳性细胞中位数明显高于其他各组,P<0.01。 3.分别以CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ为分界点作出ROC,其诊断准确性分别为0.765、0.934、0.978,95%敏感度时对应的Pin1阳性细胞比值为0.59、1.65、3.98。 结论:Pin1染色阳性细胞对CINⅡ及以上病变有较好的诊断价值,可作为液基细胞学诊断的辅助方法。 第三部分:Pin1抑制剂Juglone对宫颈癌细胞株的增殖抑制作用 目的:了解Pin1抑制剂Juglone对宫颈癌细胞株的增殖和细胞周期的影响。 方法:用MTT法检测不同浓度的Juglone和CTX对宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞的增值抑制作用。用流式细胞仪测定细胞周期,观察细胞的形态,并描绘细胞生长曲线。 结果:1.Juglone和CTX对HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞增殖均有抑制作用,Juglone作用更明显,P<0.01。24h后作用达高峰,并呈明显剂量依赖性。 2.Juglone和CTX作用于HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞株后,细胞均出现不同程度凋亡,以Juglolqe作用更明显。 3.Hela细胞经Juglone作用后以G2/M为主。 结论:Juglone对宫颈癌细胞株的增殖有明显抑制作用,并使细胞在G2/M期蓄积。 全文小结 一、Pin1在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中高表达,其表达水平与病变程度有关。 二、宫颈癌中组织Pin1表达增高,其表达水平与期别和是否有淋巴结转移有关,与组织类型和分化级别无关。Cyclin D1的表达与正常组织无差异。宫颈癌中Pin1和Cyclin D1的表达无明显相关性。 三、在宫颈上皮内瘤变组织中,Pin1表达呈不同程度升高,其表达水平与P16INK4a水平一致,也与Ki-67的表达相关。 四、Pin1染色阳性细胞对CINⅡ及以上病变有较好的诊断价值,可作为宫颈癌筛查的辅助方法。 五、Pin1抑制剂Juglone对宫颈癌细胞株的增值有明显抑制作用,并使细胞G2/M期蓄积。……