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鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗(La Sota株+N28株+SD696株)的研制

王贺民

   分别对新城疫病毒Lasota株、H5亚型禽流感病毒N28株和H9亚型禽流感病毒SD696株的毒力、增殖特性、免疫特性和特异性等生物学特性进行了研究。新城疫La Sota株对鸡脑内致病指数为0.31、对鸡胚的最小致死量的平均死亡时间为110.4小时、对10日龄鸡胚的致死率为8/10、红细胞凝集价为1∶1024、病毒含量为10~(8.5)EID_(50)/0.1ml、接种2—7日龄SPF雏鸡安全、能够特异性被新城疫阳性血清中和;H5亚型禽流感病毒N28株静脉致病指数为0.98、对10日龄鸡胚的致死率为1/10、接种4—5周龄SPF鸡分离阳性率10/10、红细胞凝集价为1∶512、病毒含量为10~(7.2)EID_(50)/0.2ml、免疫原性良好、能够被H5亚型禽流感病毒阳性血清中和;禽H9亚型流感病毒SD696株静脉致病指为0.91、对10日龄SPF鸡胚的致死率为4/10、接种4—5周龄SPF鸡分离阳性率10/10、红细胞凝集价为1∶1024、病毒含量为10~(7.5)EID_(50)/0.2ml、免疫原性良好、能够被H9亚型禽流感病毒阳性血清中和。 采用新城疫病毒La Sota株、H5亚型禽流感病毒N28株和H9亚型禽流感病毒SD696株分别接种接种10日龄非免疫鸡胚,得到病毒含量分别是10~(8.5)EID_(50)/0.1ml、10~(7.17)EID_(50)/0.2ml和10~(8.17)EID_(50)/0.2ml的三种病毒液。以上病毒液均采用最终浓度为0.2%的甲醛溶液灭活后,通过采用切向流30万级超滤膜浓缩3—4倍后,三种病毒液HA分别达到1∶1024、1∶512和1∶1024。 浓缩后病毒液按照最终含量分别为9.6%、10.8%和10.8%的比例制成3批油乳剂灭活疫苗。经过物理性状检验,疫苗均为乳白色油包水剂型;取疫苗样品10ml装于离心管中,以3000r/min离心15分钟,3批疫苗样品均不分层;用1ml吸管(上口内径2.7mm,下口内径1.2mm),吸取25℃左右的疫苗样品1ml,让其垂直自然流出,记录流出0.4ml所需的时间,3批疫苗样品流出时间均在8秒以内。 试制的疫苗通过颈部皮下或胸部肌肉分别注射4-5周龄SPF鸡10只,每只疫苗2.0ml,观察14日,全部存活,且未出现因疫苗引起的局部和全身不良反应。 试制的疫苗通过颈部皮下或胸部肌肉分别注射免疫4-5周龄SPF鸡15只,接种21日后采血,分离血清。免疫鸡新城疫、禽流感H5和H9亚型HI抗体效价均高于1∶64,对照鸡血清HI抗体检测为阴性;免疫鸡用10~5ELD50新城疫强毒北京株肌肉注射攻毒,观察14日,10/10保护,对照组全部死亡;免疫鸡用2×10~6EID50禽流感SD696株病毒液静脉注射攻毒,攻毒后病毒分离10/10阴性,对照鸡病毒分离阳性率为9/10。 试制疫苗的免疫持续期试验和疫苗保存期实验表明,疫苗免疫持续期在20周以上,疫苗保存期达到12个月以上。 试验结果表明,研制的疫苗各项指标均达到新城疫灭活疫苗、H9亚型禽流感灭活疫苗或H5亚型禽流感灭活疫苗的有关质量标准,完全可以用于新城疫、H9亚型禽流感和H5亚型禽流感的防疫。……   
[关键词]:禽流感病毒;La Sota;灭活疫苗;N28;SD696;新城疫病毒;免疫保护性;病毒液;病毒分离;鸡胚
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:扬州大学2006年