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柚皮苷对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响

欧阳菁

  目的:研究骨碎补的有效成分柚皮苷对体外培养的BMSCs增殖和骨向分化的影响,确定诱导的最佳添加浓度和添加时间,以及在诱导过程与向OB分化相关的重要蛋白BMP-2和Cbfa1mRNA的影响,从不同角度探讨中药防治骨质疏松的机理。方法:1.运用全骨髓贴壁法分离、培养病鉴定SD大鼠的BMSCs;2.将柚皮苷配成高中低三大组浓度,每大组中再设置不同的浓度梯度,用CFU-F和MTT法检测柚皮苷对BMSCs增殖的影响,了解量效关系(CFU-F:2μg/ml~500μg/ml;MTT:0.06μg/ml~500μg/ml),并分别设置对照组;3.用改良钙钴法对加入柚皮苷诱导后的细胞进行ALP染色,确定柚皮苷是否具有成骨诱导作用,并通过ALP阳性细胞计数,确定柚皮苷的添加浓度(2μg/ml~500μg/ml)和添加时间(3~15d),空白组为对照组;4.用最佳浓度的柚皮苷诱导BMSCs向OB分化,分柚皮苷组、空白组、经典诱导组、柚皮苷和经典诱导液协同作用组共四组,检测ALP和BGP的分泌情况,并观察经典诱导液与柚皮苷的交互作用;5.运用RT-PCR的方法检测各诱导体系诱导分化过程中与OB分化相关的信号蛋白BMP-2和Cbfa1mRNA的影响,分组同上。结果:1.BMSCs分离后24h基本贴壁,12-15d达到融合,经过成骨、成脂和成软骨诱导培养,BMSCs分别表现出成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞表型;2.不同浓度的柚皮苷作用后,MTT显示:低浓度柚皮苷组的OD值高于空白组,并存在一定的量效关系,与空白组相比有显著差异(P<0.05),且以1.0μg/ml和1.5μg/ml效果最好,中浓度柚皮苷组与空白组相比无明显差异(P>0.05),高浓度柚皮苷组的OD值远低于空白组(P<0.05),CFU-F显示的集落数结果和MTT类似;3.ALP阳性细胞计数示,柚皮苷具有确定的诱导BMSCs向OB分化,其低中浓度对诱导分化的影响无显著差异(P>0.05),考虑成本选用2μg/ml为最佳浓……   
[关键词]:柚皮苷;骨髓间充质干细胞;骨质疏松症;成骨细胞;增殖;诱导分化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:暨南大学2006年