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基于酸性蛋白酶的新型蛋白饲料研究

刘超

  酸性蛋白酶(Acid protease)是一种适合在酸性条件下水解蛋白质的酶类,它已被广泛的应用于食品、酿造、皮革、胶原纤维和饲料工业等诸多行业。而近年来酸性蛋白酶作为一种新型饲料添加剂的应用得到人们的广泛重视。本论文以米曲霉菌株和酵母菌CHC-3、DSF-1、GY-1为出发菌株,通过米曲霉菌株的筛选、生产酸性蛋白酶最佳培养基的优化、酵母菌培养基的优化以及混合固态发酵工艺的研究,获得一条富含小肽的新型蛋白饲料生产工艺。并对所产新型蛋白饲料进行仔猪饲喂试验以及对米曲霉所产的酸性蛋白酶进行分离纯化获取相关酶学信息。实验以米曲霉A—29和A—79等菌株为出发菌株,进行发酵培养和产酶菌株的筛选,发现菌株A—29生产酸性蛋白酶能力较强。进一步通过正交实验方法对A—29菌株酸性蛋白酶生产的培养基组成进行研究,结果表明,米曲霉A—29在豆饼粉7.5%、(NH_4)_2SO_4 0.8%、水40%、KH_2PO_4 0.25%、麸皮51.45%的固体培养基上所产酸性蛋白酶活力最高,发酵温度为30℃,最适发酵时间为72h。同时通过培养基优化实验发现,获取酵母菌CHC-3、DSF-1、GY-1最大生物量的最适混合液态发酵培养基为:麸皮5%、玉米糖浆85.2%(糖度11%)、豆饼粉9%、(NH_4)_2SO_4 0.8%。所用三株酵母菌CHC-3∶DSF-1∶GY-1以3∶4∶2的比例接种,总接种量控制在9%,发酵温度为30℃,发酵时间为24h。进一步以麸皮和豆饼粉为主要底物进行混合固态发酵工艺研究,结果在30℃条件下混合固态发酵36h,获得了酸性蛋白酶活力1440U/g,酵母菌数6.29×10~9个/g,粗蛋白含量70.56%,小肽分解率10.12%,还原糖含量8%的新型蛋白饲料。饲喂试验表明,仔猪料肉比(平均耗饲料kg/kg肉)明显低于对照组,经济效益良好。最后经过硫酸铵盐析、脱盐、DEAE—Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacry S—200分子筛层析提取了酸性蛋白酶,并经SDS—PAGE验证该酶纯化水平已达电泳纯,分子量约为45Kd。……   
[关键词]:米曲霉;酸性蛋白酶;固态发酵;小肽饲料;饲喂试验;蛋白纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南交通大学2006年
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