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薤脱毒快繁技术体系的构建及优化初探

黄钊

  薤(Allium chinense G.Don)起源于中国,是一种药、菜兼用的传统蔬菜。因长期进行无性繁殖而致使病毒积累,近年来,薤病毒病已日益成为其种性退化、品质下降以及产量降低的重要原因之一。目前,通过茎尖培养获得脱毒种苗是防治薤病毒病害和减缓种质退化的最为有效的措施。本文探索了薤的组织培养、微体繁殖的有效途径,就薤脱毒苗的获得、扩繁、试管鳞茎的形成进行了系统的研究。利用茎盘具有很强的萌芽潜力以及试管鳞茎对环境具有广泛的适应能力的特性,研究组织培养的最佳培养基激素配比,开发出一套繁殖系数高、操作简便、种苗容易驯化、控制的薤脱毒快繁技术体系。结果表明:1.在薤的茎盘外植体培养的前期消毒实验中,鳞茎冲洗后,酒精浸润30s后,用2%的次氯酸钠溶液加两滴吐温-20消毒10min,无菌水清洗4~5次,污染率降到13.8%,同时相比升汞对试管苗的生长影响较小。2.使用0.5g/L PVP进行薤的鳞片愈伤组织诱导时可以有效地抑制外植体的褐化。通过MS、LS和B_5三种培养基的比较试验,筛选出LS培养基为适合薤茎尖培养的基本培养基,同时,选取0.5~1.0mm茎尖培养可以达到较好的脱毒效果,脱毒率可达85%,同时成苗率为87%。而采用二次茎尖切割培养可以降低茎尖培养技术难度的并保证一定的脱毒效果。3.病毒检测实验中,选用指示植物法和分子技术(RT-PCR)对宜昌当地薤的花叶病毒进行前期的检测,两种方法同时检测出薤花叶病毒。脱毒后利用指示植物法与分子技术结合进行大批量脱毒苗的脱毒效果鉴定,建立了一套有效的脱毒检测手段。4.在传统茎尖培养脱毒实验基础上进行改进实验,结果表明,茎尖培养结合32℃和37℃每12h交替变温处理14d可以达到最佳的脱毒效果,脱毒率可达94%。5.对薤脱毒苗的扩繁,选用NAA和6-BA两种激素对薤的试管苗增殖率运用二次回归正交旋转组合设计方法对激素配比进行寻优,结果表明0.43~0.48mg/LNAA和1.20~1.30mg/L 6-BA配比可以达到最佳的增殖率。6.水杨酸和提高糖浓度对薤的试管鳞茎的诱导有一定的促进作用,研究表明,添加0.5mmol/L水杨酸或是6%糖浓度都能有效的提高试管鳞茎的诱导率。IBA在1.0mg/L水平上添加0.1%活性炭其根系诱导率达98.1%,大大提高试管苗的成活率。……   
[关键词]:;脱毒;快繁;组织培养
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2006年