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寻常型天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白4片段的克隆和免疫识别初步研究

李薇

  天疱疮(pemphigus)是自身抗体介导作用于表皮角质形成细胞桥粒芯糖蛋白的自身免疫性大疱性皮肤和粘膜疾病,寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris,PV)是其中最为常见的亚型。尽管已经公认桥粒芯糖蛋白-1(desmoglein 1,Dsg1)和桥粒芯糖蛋白-3(desmoglein 3,Dsg3)及其自身抗体与天疱疮发病相关,但其确切的发病机制仍不清楚。新近有研究发现了人体组织桥粒芯糖蛋白-4(desmoglein4,Dsg4)是PV自身抗体的靶抗原,为该病的研究提供了新的线索。本项研究目的是扩增人皮肤组织Dsg4胞外域(extracellular domains,ECD)EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列,进一步探讨其在PV发病中的作用。首先根据Genebank中人Dsg4的cDNA序列资料,设计Dsg4胞外域EC1、EC2、EC3和EC4 4个DNA片段的特异性引物,通过逆转录聚合酶链反应(reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法,以提取的人正常皮肤组织总RNA为模板,扩增桥粒芯糖蛋白4胞外域EC1、EC2、EC3和EC4目的基因;应用基因重组技术将目的基因分别与原核表达质粒载体pET32a在T4DNA连接酶作用下相连接,转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5α感受态细菌,用含氨苄青霉素的LB(Luria-bertani)培养基平板筛选转化菌,重组质粒DNA序列测定鉴定。结果显示RT-PCR扩增产物经凝胶电泳得到4条均约为350bp的条带;分别与载体pET32a相连接后获得4个重组质粒……   
[关键词]:天疱疮;桥粒芯糖蛋白4;克隆;表达;免疫识别
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:四川大学2006年
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