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家鸭人工感染鸭瘟强毒株的动态分布、黏膜免疫及对肠道菌群结构的影响

杨晓燕

  鸭瘟(Duck Plague,DP)又称鸭病毒性肠炎(Duck Viral Enteritis,DVE),是由鸭瘟病毒(Duck Plague Virus,DPV)引起的常见于鸭、鹅等雁行目禽类的一种急性败血性的接触性传染病。黏膜免疫是指发生在机体与外界相通腔道黏膜表面的免疫。黏膜免疫系统(Mucosal immune system,MIS)是在一定程度上独立存在于系统免疫系统之外的免疫系统,能对某些病原微生物产生有效的免疫,同时对绝大部分来自外界的无害物质或营养物质产生免疫耐受,是机体抵抗病原微生物通过黏膜入侵的重要防线。本研究对DPV强毒经不同途径感染鸭的呼吸道和消化道等局部黏膜免疫的发生和变化规律进行了检测、应用ERIC-PCR技术对肠道菌群结构的多样性和动态变化进行了初步研究和分析,获得以下系列结果:1.分别采用饱和硫酸铵沉淀法和不同浓度聚乙二醇PEG-6000沉淀法从鸭胆汁中粗提IgA,经Micro-Prep S离子交换介质纯化后,通过SDS-PAGE和ELISA检测纯度和活性。结果表明:终浓度15%的PEG-6000沉淀可从鸭胆汁中获得电泳纯的IgA,其产量最高,活性最好;经终浓度22%PEG-6000和饱和硫酸铵沉淀,Micro-Prep S离子交换介质纯化所得IgA,其产量和活性均明显下降。将纯化后的IgA免疫兔,获得了高效价的兔抗鸭IgA血清,结合辛酸-硫酸铵法粗提和离子交换层析纯化,获得了纯度较高的兔抗鸭IgA的IgG。2.结合硫酸铵沉淀和Sepharose 4B分子筛层析法,从鸭富集IgM血清中,分离纯化IgM。经SDS-PAGE电泳、琼脂扩散和2-巯基乙醇试验分析,结果显示:硫酸铵沉淀的免疫球蛋白经Sepharose 4B分子筛层析后,第一个蛋白洗脱峰为达电泳纯的IgM。采用与上一章相同的方法,获得了达电泳纯的兔抗鸭IgM的IgG。3.应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR对DPV强毒经皮下、口服、滴鼻和……   
[关键词]:;黏膜免疫;DPV;SIgA;IgA生成细胞;CD3~+细胞;肠道菌群
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:四川农业大学2006年