手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

三类蛋白质的结晶、结构及功能研究

杨茂君

  精子发生是由一系列高度有序地生化事件组成的,它包括多个基因在精确的时间和空间的调控下转录表达。为了更好的了解精子发生的分子机理,我们着手研究了精子发生过程中各个不同时期所表达的特异基因的表达、蛋白质结构及其功能。精子表面蛋白质在精子运动、精卵识别、穿孔以及精卵融合方面起到重要作用。YWK-Ⅱ蛋白是本实验室筛选出的一种人精子表面膜蛋白,其cDNA开放阅读框架编码763个氨基酸,疏水性分析显示它具有一个单跨膜结构域。YWK-Ⅱ蛋白与Alzheimer s disease(老年性痴呆症)淀粉样A4蛋白前体(APP)在胞内区与跨膜区存在70%同源性,而在胞外近膜区与APP差异很大,并具有明显的抗生育作用。酵母双杂交实验证明,YWK-Ⅱ蛋白胞外近膜区226个氨基酸片段能与大鼠穆勒氏管抑制物(rMIS)中的一个74个氨基酸的片段作用,而其中一段63个氨基酸的区域是与MIS作用的活性部位。我们利用分子生物学的方法对YWK-Ⅱ蛋白质的463位至674氨基酸及389位至574位氨基酸的两段肽段分别进行了表达、纯化、结晶和初步解析了其中一段胞外区的结构,并且得到了YWK-Ⅱ和MIS的复合物的晶体。我组还通过激光共聚焦显微成像(LCM)技术,在大鼠睾丸冰冻切片上捕获了初级精母细胞和圆形精子细胞。利用抑制性消减杂交(SSH)的方法,分别构建了初级精母细胞和圆形精子细胞的双向消减文库。RSB-66基因就是从初级精母细胞消减圆形精子细胞得到的SSH文库中得来的,这个蛋白质可能在精子发生过程中起重要作用。我们得到了这个蛋白质的晶体并且对它进行了初步的晶体学分析。人类FcaRI(CD89)分子是黏膜和血清中含量极其丰富的IgA抗体的特异性受体。尽管FcαRI也是一种免疫球蛋白的Fc受体,但是它却和其它免疫球蛋白的受体(FcR)有很大的不同,其它免疫球蛋白的FcRs大都定位在1号染色体的q21-23,上,而FcαRI却定位在19号染色体的q13.4,这个区域因为定位了几个包括杀伤细胞抑制受体(KIRs)和白细胞Ig样受体(LIRs)的白细胞受体家族而被称为……   
[关键词]:医科大学;结构与功能;HSD;MIS;受体菌;沉淀剂;结构及功能
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国协和医科大学2003年