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一、二氟甲基鸟氨酸、木黄酮对宫颈永生化上皮细胞、宫颈癌细胞及裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其细胞周期调控机理 二、宫颈癌前病变液基细胞中人乳头瘤病毒16亚型物理状态的检测

陈庆云

  二氟甲基鸟氨酸、木黄酮对宫颈永生化上皮细胞、宫颈癌细胞及裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其细胞周期调控机理目的观察二氟甲基鸟氨酸(DFMO)、木黄酮(Genistein)等对人永生化宫颈上皮细胞、宫颈癌细胞和裸鼠移植瘤的生长抑制作用,并研究它们的细胞周期调控机理。方法(1)生长抑制分析:永生化宫颈上皮细胞系(H8细胞)和两个宫颈癌细胞系(CaSki和HeLa细胞)单层培养,检测DFMO或Genistein的生长抑制作用。应用磺酰罗丹明B(SRB)法,绘制细胞生长曲线,并获得药物处理5天时抑制50%细胞生长所需药物浓度(IC_(50))。(2)细胞周期分析:应用Coulter EPICS XL型流式细胞仪分析细胞DNA含量。(3)免疫荧光分析:第一抗体为细胞周期蛋白D1(cyelin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、p21蛋白的单克隆抗体,第二抗体采用荧光素标记,应用流式细胞仪检测荧光强度。(4)逆转录PCR(RT-PCR):应用RT-PCR半定量检测细胞cyclin D1、cyclin B1、CDK4、CDK1、p21的mRNA表达。(5)恶性转化:佛波酯(TPA)转化永生化宫颈上皮细胞(H8细胞),40天。(6)恶性转化的阻断:DFMO、Genistein加入含TPA的培养基中,培养永生化宫颈上皮细胞(H8细胞),40天。(7)裸鼠移植瘤:裸鼠皮下接种TPA恶性转化H8细胞(DFMO、Genistein处理和未处理的)、宫颈癌CaSki细胞。(8)药物体内作用:给予荷瘤裸鼠DFMO、Genistein,灌胃,每日一次,14天。等量生理盐水作空白对照。(9)移植瘤瘤重:每3日测量瘤体长径和宽径,计算瘤体积,并换算为瘤重,观……   
[关键词]:二氟甲基鸟氨酸;木黄酮;宫颈;永生化;肿瘤;移植瘤;细胞周期
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国协和医科大学2004年