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抗内皮细胞抗体介导的内皮细胞损伤机制及其靶抗原研究

郑文洁

  目的研究抗内皮细胞抗体(AECA)在系统性血管炎中阳性率,并分析其临床意义;通过单克隆AECA建立抗体介导的内皮细胞损伤模型,以研究AECA在血管炎中导致内皮细胞损伤的可能机制;应用蛋白质组学技术,分离和鉴定与血管炎相关的AECA靶抗原。方法1.应用细胞ELISA、间接免疫荧光(IIF)、免疫印迹法检测AECA,分析其相关性和临床意义:1) 固定的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为抗原,细胞ELISA法检测129例系统性血管炎[其中白塞病(BD)59例,大动脉炎(TA)28例,韦格纳肉芽肿(WG)20例,结节性多动脉炎(PAN)8例,显微镜下多血管炎(MPA)9例,变应性肉芽肿血管炎(CSS)5例]、57例系统性红斑狼疮(SLE)、25例类风湿关节炎(RA)等患者和100例正常对照者中AECA阳性率,并分析系统性血管炎组AECA与临床生化指标的相关性。2) 以HUVEC为底物,IIF法检测系统性血管炎患者中AECA阳性率,比较ELISA和IIF法检测系统性血管炎AECA阳性率有无差异及其结果的相关性。3) 比较分别以HUVEC、EA.hy926细胞(内皮细胞系)为底物,ELISA法检测AECA阳性率有无差异及其结果的相关性。4) 提取EA.hy926细胞蛋白,免疫印迹法检测系统性血管炎和系统性红斑狼疮患者的AECA。2.制备、鉴定单克隆AECA(mAb AECA);应用流式细胞仪、DNA片段化、荧光显微镜检测mAb AECA诱导HUVEC凋亡;应用免疫印迹法、免疫组化法检测调节细胞凋亡的相关蛋白(NFκB P65、IκBα、Bcl-2和Caspase-3)的表达。3.应用双向电泳结合免疫印迹法、液相色谱—电喷雾离子阱质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,分离和鉴定与血管炎相关的AECA靶抗原。……   
[关键词]:内皮细胞;抗内皮细胞抗体;细胞凋亡;自身抗原;双向电泳;电喷雾电离质谱
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国协和医科大学2004年