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新疆荒漠昆虫光滑鳖甲(Anatolica Polita borealis)cDNA文库的构建及相关功能基因筛选

杨长庚

   在新疆的荒漠极端环境中生活着多种昆虫,渡过新疆严寒的冬天而不被冻死。它们通过生理学、生物化学、行为学等方面的改变来提高自身的抗冻性能。与抗冻性能直接相关的是昆虫机体的过冷却点。过冷却点越低,昆虫的抗冻性能就越高。体内冰晶生长因子、低温保护和抗冻蛋白会导致过冷却点的变化。 抗冻蛋白又被叫做热滞蛋白,它能够有效地降低昆虫体液的冰点,从而防止体液中大体积冰晶的形成。由抗冻蛋白造成的冰点和熔点之间的差值被叫做热滞值,目前热滞值被用做衡量抗冻蛋白活性的重要参数。抗冻蛋白的作用机理目前较为合理的是吸附抑制学说:抗冻蛋白主要是通过吸附在冰晶表面阻碍水分子和冰晶的结合从而屏蔽了冰晶的进一步生长,达到有效抑制冰重结晶的作用,维持体液的非冰冻状态。 怎样将昆虫的抗冻机制应用于其他领域,特别是用于提高作物抗冻特性,目前已成为生物技术领域一个新的课题。近年来,生物学家在将传统育种学和生物工程相结合提高作物的抗冻能力方面做了大量工作,但是进展依然很缓慢。这主要是因为昆虫的耐冻机制非常复杂,而人们对此研究不多 为了更好的研究新疆特殊环境下昆虫的抗冻机制,我们选择主要分布于新疆荒漠戈壁地区的拟步甲属昆虫光滑鳖甲为研究材料,采用SMART技术,构建了越冬光滑鳖甲的cDNA表达文库 根据大肠杆菌XL1-Blue平皿测定和PCR快速鉴定表明,文库的重组率为84.8%,初级库容量为2.1×106pfu/ml,平均插入片段长度为870bp,由此证明所构建的文库达到了用于EST测序和目的基因分离筛选的建库要求。 经过随机测序得到了28条EST序列,其中60.7 %是已知序列,39.3%是无显著相似性基因。以所建文库的噬菌体DNA为模板,根据国际核酸数据库中……   
[关键词]:光滑鳖甲;cDNA文库;表达序列标签;抗冻蛋白;抗菌肽
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:新疆大学2006年