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产热凝胶细菌的筛选鉴定及产物理化性质的研究

钟颜麟

  本论文系统研究了Q9415菌及其胞外多糖PS-9415,主要结果如下:1、采用Czapek-Dox培养基从湖北沙壤土中筛选出野生菌Q9415,其发酵液加热至90℃冷却到室温能形成弹性极好的白色凝胶。根据伯杰氏系统细菌学手册,经系统鉴定为放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)。Q9415菌在YM琼脂培养基上,30℃培养3~4d,菌落呈乳白色、有光泽、不透明、中凸、圆整、粘稠,菌落直径6mm左右。Q9415菌为革兰氏阴性杆菌,大小为1.2~1.8μm×0.5~0.8μm,两端钝圆,好氧,生长温度范围4℃~42℃,生长pH范围4~9,不产色素,无芽孢,无动力,有1~2根亚极生鞭毛,氧化酶、过氧化氢酶、ONPG酶、尿酶阳性,利用柠檬酸盐,鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶阴性,不水解明胶、淀粉、土温80,不还原硝酸盐,不产硫化氢,吲哚反应阴性,V-P试验阳性,O/F试验产酸,石蕊牛奶产碱,牛奶胨化,有血清环,发酵型,发酵后期在菌体内积累大量的PHB。2、Q9415菌的生长与产胶为非偶联型,对数生长期结束后开始分泌大量的胞外多糖。在摇瓶条件下,采用蔗糖3%,蛋白胨0.2%,K_2HPO_4 0.05%,MgSO_4 0.01%,MnSO_4 0.01%,CaCO_3 0.01%,微量元素混合液0.01%,土温80 0.2%,pH7.0~7.2,在180r/min、32℃培养20h后,28℃培养至96h,发酵液粘度和产胶量分别达1.50Pa.s和14.02g·L~(-1),碳转化率46.73%。用5L自控发酵罐加大接种量、流加碳源、增大溶氧则可将发酵周期缩短至50~60h,使发酵液粘度和产胶量大幅增加。在乳清粉中添加适量蔗糖、蛋白胨及无机盐,可缩短Q9415摇瓶发酵乳清粉生产胞外多糖的发酵周期至84~96h,发酵液粘度和产胶量最高分别可达1.2Pa·s和10.67g·L~(-1)。这一结果为该菌使用廉价原料和开发乳清粉新用途提供了依据。3、采用离心除菌、95%乙醇沉淀、Sevage试剂脱蛋白、透析脱盐、聚乙二醇浓缩、异丙醇沉淀、真空干燥器干燥等步骤处理发酵液可得到纯化的PS-9415多糖。在发酵后期添加0.1%提取助剂A,在提高产胶量的同时可使PS-9415的提取……   
[关键词]:放射形土壤杆菌(A. radiobacter)Q9415;胞外多糖;发酵;分子结构;流变学;凝胶;动态粘弹性
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:华南理工大学2000年