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微生物来源CpG疫苗佐剂筛选研究

刘艳环

  CpG-DNA是一些具有免疫激活功能的以未甲基化的CpG基序为核心的DNA序列,它包括含CpG基序的人工合成的寡聚脱氧核苷酸和自然界中低等生物的基因组DNA。大量研究证实,CpG-DNA在体内外均能刺激多种免疫活性细胞分泌多种细胞因子并能调节某些表面分子、趋化因子、粘附因子和共刺激分子等,诱导机体天然免疫系统活化,并产生抗原特异性的获得性免疫应答。本项研究依据CpG-DNA的特性,合成和克隆了32条CpG-DNA序列,通过体外筛选及动物免疫试验选出4种免疫效果好、安全可靠的序列,为CpG-DNA免疫佐剂应用打下了基础。研究内容如下:从四种非致病性的食品酿造菌(枯草芽孢杆菌、德氏乳酸菌、黄色短杆菌、双歧杆菌)基因组中找出27条CpG-DNA序列,由北京华大中生科技发展有限公司合成;在坏死梭杆菌保护性抗原基因筛选工作中,克隆了许多基因片段质粒,从中找出4条富含CpG-DNA的序列;同时,在检索节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因中的CpG-DNA过程中,发现C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因中CpG-DNA含量较高,将克隆的坏死梭杆菌基因片段质粒菌株与节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因质粒菌株分别提取质粒,ECOR1酶切后回收目的CpG-DNA片段。无菌采取羊、小鼠血液,肝素钠抗凝。用淋巴细胞分离液分离羊、小鼠淋巴细胞。通过淋巴细胞增殖试验筛选出4种对羊、小鼠淋巴细胞都有较强细胞增殖作用的序列。将淋巴细胞增殖试验选出的CpG-DNA进行动物安全性试验,结果均无毒副作用。分别用坏死梭杆菌抗原、重组节瘤拟杆菌纤毛蛋白抗原制备弗氏完全佐剂疫苗、氢氧化铝胶佐剂疫苗、CpG-DNA佐剂疫苗、CpG-DNA氢氧化铝胶佐剂疫苗免疫小鼠,发现CpG-DNA单独作为佐剂免疫期较短,CpG-DNA与氢氧化铝胶配合制成CpG-DNA氢氧化铝胶佐剂疫苗后与弗氏完全佐剂疫苗有几乎同样的免疫效果,明显好于氢氧化铝胶佐剂疫苗,质粒酶切回收的CpG-DNA片段与完整质粒免疫佐剂作用无明显差别。……   
[关键词]:CpG-DNA;免疫佐剂;疫苗
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业科学院2006年