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人血管内皮生长因子受体-3胞外1-3区基因的表达

曹静

  目的1.血管内皮生长因子受体-3基因的原核表达载体构建2.血管内皮生长因子受体-3基因的原核融合表达方法以本实验室构建的克隆质粒为模板,设计合适引物,在上游引物中加入酶切位点和起始密码,在下游引物中加入终止密码和酶切位点,把上述VEGFR3扩增产物经切胶回收纯化后与pBV220质粒经双酶切纯化后的产物连接,把该质粒命名为pBV220-VEGFR3,转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性菌株,温控诱导表达,超声破菌,对包涵体进行洗涤纯化。以pBV220-VEGFR3为模板通过PCR方法构建C端含有HisTag的pBV220-VEGFR3his质粒并转化大肠杆菌DH5α,用Western-blotting鉴定,用Ni~(2+)-NTA树脂柱对表达产物进行纯化。结果构建了pBV220-VEGFR3质粒表达载体,SDS-PAGE电泳表明在大肠杆菌DH5α中成功表达出VEGFR3因子,同时构建了pBV220-VEGFR3融合表达载体,SDS-PAGE电泳和Western-blotting结果表明在大肠杆菌DH5α中成功表达出VEGFR3融合蛋白,用Ni~(2+)-NTA树脂柱纯化后获得VEGFR3融合蛋白纯品。结论应用基因工程技术,成功构建了pBV220-VEGFR3质粒表达载体,表达纯化出蛋白,为进一步的研究奠定了基础。……   
[关键词]:人血管内皮生长因子受体-3;蛋白表达;融合
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山西医科大学2006年