手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

H5N1亚型禽流感病毒NS1149位氨基酸对生物学功能的影响

王爱琴

   以有限稀释法纯化早期病毒分离储存液,得到两株对鸡致病性完全不同的H5N1亚型毒株。其中A/Goose/Guangdong/1/96(GSGD/1/96)为中国大陆首次分离到的H5N1亚型高致病力禽流感病毒,A/Goose/Guangdong/2/96(GSGD/2/96)为H5N1亚型低致病力禽流感病毒。全基因组测序表明:二者HA裂解位点氨基酸相同,而各基因编码的氨基酸中却存在五个氨基酸差异。本论文即为研究H5N1亚型禽流感病毒GSGD/1/96和GSGD/2/96对鸡完全不同致病性的决定因素。 利用反向遗传基因操作技术,将其两株病毒的基因组分别克隆到PBD载体上构建成转染质粒,两株病毒存在有不同氨基酸的转染质粒分别替换重组,转染293T细胞,拯救重组病毒。成功救获出重组病毒有RGD/1/96、RGD/1/2PA、RGD/1/2NP、RGD/1/2M、RGD/1/2NS、RGD/2/96、RGD/2/1PA、RGD/2/1NP、RGD/2/1M、RGD/2/1NS。10株重组病毒和两个亲本野毒对SPF鸡的致病性实验表明, GSGD/1/96、GSGD/2/96 H5N1亚型的禽流感病毒的NS基因在对鸡的致病性方面起重要的作用。 两株亲本野毒和四株重组病毒RGD/1/96、RGD/2/96、RGD/1/2NS、RGD/2/1NS鼻腔感染6周龄的SPF鸡和4周龄的非免疫鹅。实验结果显示H5N1亚型的禽流感病毒GSGD/1/96、GSGD/2/96对SPF鸡和非免疫鹅表现出不同的感染程度,进一步说明了NS基因编码的NS1非结构蛋白对流感病毒在鸡鹅体内的增殖起重要的作用,并且这两株病毒NS1非结构蛋白只有149位氨基酸不同,也可以说NS1 149位氨基酸在H5N1亚型禽流感病毒GSGD/1/96、GSGD/2/96致病性方面起决定性的作用。 两株H5N1亚型禽流病毒对SPF鸡的致病性差异主要源于NS1非结构蛋白149位氨基酸的不同。为进一步阐明GSGD/1/96、GSGD/2/96 NS1 149位氨基酸对NS1蛋白拮抗干扰素的影响。将利用反向基因操作技术救获的四株病毒RGSGD/1/96、RGSGD/2/96、RGD/1/2NS、RGD/2/1NS感染鸡胚成纤维细胞诱生干扰素,然后用插入荧光蛋白的水泡性口炎病毒(VSV-GFP)检测干扰素的含量。结果表明149位氨基酸影响NS1蛋白拮抗干扰素功能,在病毒感染过程中, NS1蛋白149位为Val时拮抗干扰素系统的能力弱,病毒感染鸡胚成纤维细胞诱导产生的干扰素足以抑制VSV-GFP的增殖。NS1蛋白的149位为Aal时拮抗干扰素系统的能力强,病毒感染不能诱导产生足量的干扰素来抑制VSV-GFP的增殖。……   
[关键词]:H5N1亚型禽流感病毒;NS1蛋白;149位氨基酸;干扰素;抗病毒
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:内蒙古农业大学2006年