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利用SSR指纹技术构建玉米品种指纹图谱及遗传多样性研究

孔祥彬

   本研究从100对SSR引物中筛选出多态性好、重复性好、带型清晰易于统计的20对SSR引物应用于玉米自交系和杂交种的指纹图谱构建,并且建立了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术体系。进一步对自交系进行了遗传多样性分析。主要研究结果如下: 1.建立了适于玉米DNA分析的SSR技术体系:采用玉米种子DNA快速提取方法(提取液成份为: 100 mmol/LTris-HC1 (pH 8.0), 50mmol/LEDTA, 100mmol/LNaC1, 1.5% SDS,氯仿抽提一次,去除蛋白质,得到了基本无降解、可以满足SSR检测的玉米籽粒基因组DNA);优化了玉米的SSR反应体系(20μl的反应体积中包括2.0mmol/LMg2+,0.1mmol/LdNTPs,0.25μmol/L引物, 0.5UTaqDNA聚合酶, 10×PCR buffer 2.0μl和40ng模板DNA);采用10%非变性丙烯酰胺凝胶电泳,稳压140V,3.5小时;采用改进银染法显色。 2.探讨了多重PCR技术:根据8对玉米SSR引物单一扩增片段大小,组成不同的引物组合迸行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,28个双重PCR组合出现三种情况:两对引物均扩增正常(12个)、只有一对引物扩增正常而另一对扩增带弱或未扩增(6个)、两对引物均未扩增带或错误扩增(10个)。这些筛选出的正常扩增的组合可应用于玉米DNA指纹库构建研究中。 3.引物的筛选:从100对SSR引物中筛选出20对能产生稳定遗传多态性的引物,从中选出多态性强的12对引物应用到品种指纹构建和纯度检测,以及遗传多样性分析中。 4.自交系、杂交种指纹图谱及纯度检测:找到了502、关17、Mo17、吉846、E28等自交系的特异指纹图谱带。利用bnlg1358/ bnlg1018两对引物组合即可将8个杂交种全部区分开。 5. 24份骨干自交系遗传多样性分析:共检测到119个等位变异,平均每个位点的等位变异数为7.4375个,变化范围3-11个。平均多态性……   
[关键词]:玉米;指纹图谱;遗传多样性;微卫星(SSR);非变性聚丙烯酰胺凝胶;自交系
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2006年