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李属坏死环斑病毒CN-Huairou分离物的初步研究及种苗传毒风险模拟评估

黄冲

  李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus, PNRSV)是我国1992年公布的进境二类检疫危险性有害生物,本研究采用生物学、血清学和反转录PCR检测方法对采集于北京核果主产区怀柔、平谷的樱桃、杏、桃和李树叶片共70份样品进行了检测,结果在怀柔地区发现了李属坏死环斑病毒。将检测阳性的樱桃叶片的研磨汁液摩擦接种于鉴别寄主黄瓜上,分离得到该病毒的一个分离物,定为CN-Huairou。本研究对该分离物,通过RT-PCR扩增、连接pMD18-T载体、转化大肠杆菌DH5α,克隆了该分离物的外壳蛋白基因片断,并进行了测序分析。序列分析结果表明,李属坏死环斑病毒CN-Huairou分离物与德国酸樱桃上分离的Ring17和4-8同源性达到100%,该分离物核苷酸在第118~125bp间有6bp核苷酸序列差异,表现在氨基酸上为第39~42aa间有两个氨基酸差异;该分离物CP基因的第62、81和126位氨基酸分别与PNRSV CH9血清型温和致病型相应氨基酸相同。将所获得的分离物与47个其他地区的分离物,特别是我国分离到的11个分离物进行同源性和进化树分析,48个分离物的氨基酸序列同源性为89%~100%,我国12个分离物的同源性在93%~100%,属于三个不同的组,除CN-Huairou、CN-Changli属于Hammond划分的表现温和症状的Group Ⅱ(PV96),CN-Hangzhou属于GroupⅢ(PE5)外,其他9个分离物均属于Group Ⅰ(PV32),且分离物间不表现明显的地域相关性或寄主相关性。本研究基于Monte Carlo模拟理论,利用Delphi7.0开发了有害生物风险评估系统PRAS,该系统可以通过场景分析、数学模型构建和随机模拟对有害生物风险进行定量评估。利用PRAS对种苗传毒风险进行了模拟评估,不同引种数量、不同带毒率对种苗传毒风险的模拟评估结果表明,在10000次引种模拟中,达到种苗传毒零风险需要满足:种苗带毒率在0~1%时,引种限量应在0~250株;种苗带毒率在1.1~2%时,种苗引种限量在0~100株:种苗带毒率在2.1%~5%时,种苗引种限量应为0~50株;在国家规定的引种限量内,果树种苗带毒率<=0.4%、木本花卉种苗带毒率<=1%时,病毒随种苗传入风险为零。……   
[关键词]:李属坏死环斑病毒;外壳蛋白;序列分析;有害生物风险评估系统;风险评估
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业大学2005年