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金桔组织培养及其形态发生与生理生化变化

曾明

  本研究以金桔上胚轴为离体培养材料,研究了愈伤组织诱导和器官发生的适宜条件,建立离体培养再生体系。通过石蜡切片观察了离体培养过程中外植体形态发生的变化过程;用紫外分光光度法和聚丙烯酰胺凝胶电泳分别研究了离体培养过程中可溶性蛋白含量和几种同工酶的变化。实验结果表明:6-BA和NAA适当浓度配比对离体诱导和分化有促进作用,愈伤组织诱导以6-BA1.5mg/L+NAA1.0mg/L为佳,第24d愈伤组织增长20.3倍。愈伤组织分化以6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L为佳,分化率为75%。生根培养时,较高的NAA浓度(1mg/L)易产生愈伤组织,较低浓度无机盐有利于生根,以1/2 MS+NAA0.5mg/L较好,生根率为95%。金桔上胚轴离体再生为器官发生型,芽体多由愈伤组织内部形成,少数由愈伤组织表面发生。过氧化物酶(POD)中POD_1与诱导过程的启动有关;POD_2、POD_5和POD_6在诱导第12d天出现,是愈伤组织快速增殖的标志;POD_4在一开始诱导时消失,到分化培养第24d再现,与芽的形成有关。超氧化物歧化酶(SOD)中SOD_4在愈伤组织诱导第12d消失,是愈伤组织快速增殖的标志;SOD_2和SOD_7均在分化第24d出现,是形成芽的标志。过氧化氢酶(CAT)只出现一条酶带,其稳定表达,对维持细胞代谢环境的稳定有重要作用。苹果酸脱氢酶(MDH)在诱导阶段逐渐变强,在出芽前后有一个波动;MDH_4在诱导第2d出现,到分化第24d后消失,可能为离体培养中特殊生理代谢所需。可溶性蛋白含量在愈伤组织诱导阶段,呈现“W”形变化,第4d时出现一个小峰,之后呈上升趋势,这与诱导过程的启动及愈伤组织增殖相一致;在愈伤组织分化阶段呈“U”形变化,分化第1-18d逐渐下降,之后又上升,这与愈伤组织分化初期消耗可溶性蛋白及新芽发生时蛋白质快速合成相一致。……   
[关键词]:金桔;离体培养;形态发生;同工酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南昌大学2005年
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