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口服DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7)抗大肠癌血管生成的实验研究

陈明清

  目的:制备抗肿瘤血管生成口服DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7),研究该疫苗抗BALB/c小鼠大肠癌生长和转移的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:1.提取BALB/c胎鼠总RNA,采用RT-PCR技术扩增出VEGFR2胞外cDNA全长序列flk-1_(n1-7),以质粒pcDNA3.1(+)为载体,构建成重组质粒pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7),经脂质体介导将其转染COS-7细胞,并用Western blot方法检测其蛋白表达。2.将pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7)转化感受态减毒沙门氏菌SL3261,制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗。3.将小鼠分为疫苗组、空质粒组和生理盐水组,两周内各口服接种三次后,用CT-26细胞建立结肠癌皮下动物模型,观察小鼠的中位生存期。4.将小鼠分为疫苗组、空质粒组和生理盐水组,两周内各口服接种三次后,用CT-26细胞建立结肠癌皮下动物模型;流式细胞仪分别于接种疫苗前、接种疫苗后、接种CT-26细胞后测血液CD3~+值和CD8~+值;接种CT-26细胞28天后处死全部小鼠,取出肿瘤,称重,测体积,免疫组织化学法计数肿瘤微血管密度,透射电镜观察细胞超微结构变化,观察疫苗对小鼠CT-26细胞皮下肿瘤的抑制作用。5.将小鼠分为疫苗组、空质粒组和生理盐水组,两周内各口服接种三次后,从脾脏下极包膜内接种CT-26细胞,建立结肠癌肝脏转移动物模型;记录小鼠的体重变化;流式细胞仪分别于接种疫苗前、接种疫苗后、接种CT-26细胞后测血液CD44v值;接种CT-26细胞15天后处死全部小鼠,取出肝脏和脾脏,称重,测体积,病理学检查,体视学计数肝脏肿瘤转移灶个数,观察疫苗对小鼠肝转移的抑制情况。结果:1.成功地克隆出VEGFR2胞外cDNA序列flk-1_(n1-7);构建成重组质粒pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7),测序证实与GenBank公布的小鼠VEGFR2胞外序列一致,Western blot法检测到flk-1_(n1-7)在COS-7细胞中的蛋白表达。2.成功地将pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7)转化了减毒沙门氏菌SL3261,制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7)。3.皮下动物模型显示:疫苗组小鼠的中位生存期……   
[关键词]:VEGFR2;flk-1;口服;DNA疫苗;大肠癌;抗血管生成;转移
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:昆明医学院2005年