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五指山小型猪SLA-DQA基因的SNPs及猪人MHC Ⅰ类区自然杀伤细胞KIRs结合区氨基酸变异的比较分析

顾茂松

  异种器官移植一直被认为是解决人体移植器官供体匮乏问题的方法。随着转基因及基因双敲除猪的相继问世,对异种移植的发展产生了巨大的推动作用。MHC编码移植抗原,控制移植排斥反应,参与免疫应答调控和免疫识别,是移植物在受体内能否成活的关键。鉴于此,本实验首次比较详细的完成了五指山小型猪群体中几个经典的SLA基因的SNPs检测,并对五指山小型猪—人异种移植免疫进行初步的研究,获得的结果如下:(1)采用PCR-SSCP结合克隆测序技术,检测五指山猪群体中SLA-DQA,DQB第二外显子的多态性。结果发现SLA-DQA第二外显子存在碱基的颠换(A/C),引起氨基酸的改变(K/Q);而SLA-DQB第二外显子区域没有发现多态。(2)利用AS-PCR技术对SLA—DQA进行准确分型。设计等位基因序列特异性引物直接从DNA水平上对存在多态的SLA-DQA基因进行分型,并取得了满意的效果,与测序结果100%相符。(3)依据猪EST所构建的EST重叠群,设计的猪特异引物分离并鉴定五指山猪群体中SLA-1,SLA-2基因第二和第三外显子的多态性。在五指山猪群体中SLA-1,SLA-2基因分别存在两个等位基因,并且这两个基因多肽结合区与人相应部分氨基酸序列间均存在50%~55%的同源性。(4)对五指山猪群体中SLA Ⅰ类基因核苷酸序列系统数分析,发现与SLA-3基因相比,SLA-1、SLA-2基因间存在较高的同源性。(5)将猪SLA Ⅰ类基因与人HLA Ⅰ类基因NK细胞杀伤抑制受体结合区相应氨基酸进行了比较分析,结果发现它们都存在一个以上氨基酸的差异,这使得它们与NK细胞杀伤抑制受体基本上很难结合。……   
[关键词]:五指山猪;SLA复合体;单核苷酸多态性;氨基酸变异
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2005年
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