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牛胚胎干细胞的分离与克隆

安立龙

  胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(inner cell mass.ICM)或原始生殖细胞(Primordial germ cells.PGCs)分离和克隆的具有全能性的细胞。ES细胞在体外分化抑制培养时,可以增殖冷冻,操作和筛选,又可通过胚胎嵌合和细胞核移植参与各种组织(包括生殖腺在内)的发育,形成克隆动物。ES细胞作为一种新型的实验材料,广泛应用于动物克隆、转基因动物的生产、真核细胞基因的表达与调控、人类遗传病动物模型的创建,人类器官移植材料的生产以及细胞分化机制的研究等领域。ES细胞分离与克隆技术与遗传工程和胚胎工程相结合,对于阐明动物生长发育的基本规律、抢救和保护濒危动物遗传资源、建立先进的动物育种技术体系具有重大的理论意义和实践价值。尽管家畜ES细胞具有广阔的应用前景。但有关技术尚未成熟。本研究以牛和小鼠胚胎为材料,从成纤维细胞的分离与克隆,成纤维细胞的冷冻保存,成纤维细胞饲养层的制备,体外分外抑制培养牛胚胎生长行为,牛ES细胞分离与克隆、牛ES细胞的鉴定以及影响牛ES细胞分离与克隆的因素等方面,对牛ES细胞分离与克隆技术进行系统研究,主要内容包括:1 犊牛睾丸和小鼠胎儿成纤维细胞分离与克隆技术体系的建立以小鼠胎儿和牛睾丸为材料,以DMEM(低糖)+15%NBS+0.1mMβ—巯基乙醇+0.1μM Na_2SeO_3为培养液,以0.25%胰蛋白酶+0.04%EDTA为消化液,建立了小鼠胎儿成纤维细胞和牛……   
[关键词]:;胚胎内细胞团;胚胎干细胞;成纤维细胞;分离;克隆;抑制分化;冷冻保存
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:西北农业大学1999年