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分泌抗氨苄青霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

杜根成

  本试验用将氨苄青霉素(AMPI)半抗原和载体蛋白BSA、HAS、KLH用戊二醛法连接,室温反应4h左右,用pH6.0的PBS 4℃透析48h,计算人工结合抗原浓度和半抗原的结合比,AMPI-BSA、AMPI-HSA、AMPI-KLH结合比分别为118、44、2192,并用SDS-PAGE进行鉴定,结果表明成功将AMPI连接到载体蛋白上,制备了人工结合抗原。用制得的人工结合抗原和等量弗氏佐剂(FA)混合,釆用小剂量,延长免疫时间和免疫间隔的长程免疫法免疫8周龄Balb/c小鼠,免疫间隔1个月左右,免疫5~6次,免疫时间在5~6个月。取免疫Balb/c小鼠的脾细胞和SP_2/O用50%聚乙二醇(PEG 4000)融合细胞,用建立的间接ELISA方法,筛选阳性克隆细胞孔,经过3次有限稀释法克隆和亚克隆,得到2株能够分泌抗AMPI抗体的杂交瘤细胞株,分别命名2D_5、4C_5。经鉴定2D_5、4C_5染色体数目分别为95.6条、96.9条;上清效价分别为:1∶1024、1∶512;腹水的效价分别为:1∶102400、1∶204800,提纯后的腹水的效价分别为:1∶102400、1∶102400;提纯腹水蛋白含量分别为5.16mg/mL、7.23mg/mL,亚型分别为IgG_(2b)、IgG_(2a)。阻断试验表明结果表明只有AMPI可以特异的阻断腹水,青霉素有一定的阻断效果,和氨苄青霉素同属β-内酰胺类抗生素的头孢氨苄和链霉素、诺氟沙星、红霉素一样也没有阻断效果。传代培养20代,3个月内复苏冻存3次,2D_5、4C_5能够比较稳定分泌抗体。本论文在制备人工结合抗原和免疫的基础上,筛选到抗AMPI的McAb,为建立一种检测动物食品中PENs残留的快速灵敏的ELISA方法,或者和肢体金技术结合制备更加简便的检测试纸,进而为我国兽药残留监控提供技术支持。……   
[关键词]:氨苄青霉素;载体蛋自;戊二醛法;单克隆抗体;杂交瘤
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河南农业大学2005年