手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

甲基对硫磷降解菌的鉴定与降解性能分析和植酸酶PHYA的纯化与酶学性质研究

姜红霞

  化学农药在农业生产中具有重要作用,但农药的大量使用严重危害人类健康,破坏农业生态平衡;有机磷农药是化学农药中的一大类,在生产中被广泛使用,但它们属于神经毒剂,能引起人畜不同程度的中毒并造成严重的环境污染;甲基对硫磷是其中的典型代表。微生物降解在农药的生物降解中占主导地位。筛选具有降解有机磷活性的微生物,研究其降解性能,并克隆其与降解有关的基因,进而应用于农药的降解处理,具有重要的实践意义。本实验通过生理生化性质和16S rDNA同源性鉴定了实验室保存的两株甲基对硫磷降解菌X-13、X-20,结果表明:X-13 为枯草芽孢杆菌;X-20属于产碱菌属,我们将其暂编号为Alcaligenes.sp.YcX-20,16S rDNA 基因片段在GenBank 中注册号为AY628412。参与甲基对硫磷降解的酶属于磷酸酯酶,两株菌的酯酶活性都随菌液浓度的增加递增,且与菌株的生长曲线正相关。X-20 的酯酶活性高于X-13。在以甲基对硫磷为唯一碳源的液体基础培养基中黑暗培养24h,培养基混浊度增加,菌体增长,同时培养基上清中对硝基苯酚含量增加。初步预测降解菌可以将MP 降解为对硝基苯酚。以MP 为唯一碳源的基础培养基培养,X-13 在甲基对硫磷浓度小于150mg/L 时正常生长,X-20 当甲基对硫磷浓度小于500 mg/L 时正常生长;在普通培养基上两菌株分别能耐受300mg/L 和900 mg/L 的甲基对硫磷;在营养丰富的条件下,菌种能更好的利用甲基对硫磷。气相色谱法测定X-20 对甲基对硫磷的降解表明,在以50mg/L 甲基对硫磷为唯一碳源的培养基中30℃, pH7.0 培养30h 降解率50%。实验中尝试多种质粒提取方法,在两株菌中都没有提取到质粒,初步确定试验菌株可能不含有降解质粒,其降解基因可能存在于染色体上。用PCR 和鸟枪法筛选X-20 降解基因,都没有得到目的片段;推测该菌编码甲基对硫磷降解的基因属于一种新型基因。……   
[关键词]:农药;甲基对硫磷;降解;有机磷水解酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2005年