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自体外周血干细胞移植治疗慢性肝病的实验研究

朱磊

  目的 本研究通过观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对四氯化碳(CCl4)致肝硬化大鼠肝脏和外周血中 CD34+细胞的动员作用,以及对肝硬化大鼠肝脏生化指标的影响,寻求一种安全有效、不加重肝损伤的动员外周血造血干细胞的方法,以及能够有效标记外周血干细胞的长期示踪剂;探索自体外周血干细胞移植在肝硬化大鼠肝脏定殖的有效途径。为利用自体外周血干细胞移植的方法治疗慢性肝病的可能性提供依据。 方法 使用 50%四氯化碳橄榄油溶液皮下注射建立肝硬化大鼠模型,动员组大鼠皮下注射 rhG-CSF,对照组给与相同剂量生理盐水注射。采集外周血及大鼠肝脏,通过流式细胞仪测定外周血单个核细胞中的 CD34+细胞的比例,利用免疫荧光法观察大鼠肝脏表达 CD34抗原的细胞。同时采集正常大鼠组、肝硬化模型组、动员后大鼠外周血,行肝脏生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(T-BIL)、白蛋白(ALB)检查,观察 rhG-CSF 对肝硬化大鼠肝脏的影响。使用荧光染料 PKH26 标记外周血单个核细胞,流式细胞仪分析标记效率,倒置相差荧光显微镜观察标记后形态。通过经门静脉、经脾脏下极、经肝内注射三种途径自体移植标记后的外周血单个核细胞约 1×106个,分别在移植后8、12 周采集大鼠肝脏右叶,荧光显微镜观察 PKH26 标记的细胞在肝硬化大鼠肝脏中的定殖。 结果 注射50%CCl4计70天时,HE染色和Masson染色显示大量假小叶形成,生 化 指 标 与 正 常 对 照 组 相 比 ALT(323.50±103.72 vs 36.50±5.24IU/L, P<0.01),AST(702.83±190.54vs83.17±11.70IU/L,P<0.01),ALB(21.35±1.20vs29.58±1.84g/L,P<0.01), TBIL( 12.87±2.01 vs 2.78±0.43μmol/L,P<0.01),提示肝硬化模型建造成功。皮下注射 rhG-CSF10μg/kg/day 动员 5 天,与生理盐水动员组相比,外周血CD34+ 细胞占单个核细胞比例( CD34+ 细胞/MNC )在 rhG-CSF 动员组为4.08±1.38% ,是对照组(0.43±0.21%)的 9.5 倍(P<0.01);而在肝硬化大鼠肝脏中,仅有血管内皮细胞表达少量 CD34抗原,与生理盐水动员对照组相比没有显著……   
[关键词]:重组人粒细胞集落刺激因子;肝干细胞;PKH~(26)染料;外周血干细胞移植
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:大连医科大学2005年