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微孢子虫表面蛋白生物学功能研究

刘强波

  微孢子虫是一类广泛存在的、专营细胞内寄生生活的、无线粒体的单细胞真核生物。微孢子虫的种类很多,至今发现的微孢子虫种类超过1200种,分别划入近150个属。微孢子虫危害相当大,涉及到农业生产的很多领域,甚至包括人在内的大量生物都受到很大威胁。历史上,法国等欧洲国家曾因微孢子虫使蚕桑业毁于一旦。近年来,人感染微孢子虫的病例逐渐增加,对人类健康和社会经济造成了严重的威胁。因此,加强对微孢子虫的研究显得尤为迫切。本研究以家蚕微孢子虫为实验材料,较为详细的研究了家蚕微孢子虫表面蛋白的屏护、识别以及免疫攻击等生物学功能,并以家蚕和桑尺蠖为感染对象进行了感染试验,就家蚕微孢子虫转宿主寄生以后表面蛋白发生的变异,探讨了微孢子虫感染适应性等问题。现将研究结果报告如下:一、微孢子虫表面蛋白屏护功能研究1.微孢子虫经过SDS法温和处理后,测得蛋白质提取液浓度为0.218mg/ml,显微镜观察微孢子虫孢子均保持了完整形态;微孢子虫经SDS法脱去表面蛋白前后考马斯亮兰R-250和1%的曙红B染色对比表明微孢子虫表面蛋白对微孢子虫维持相对稳定的内环境具有重要作用。2.微孢子虫(N.bombycis)经SDS法温和处理脱除孢子表面蛋白后,对家蚕的感染率从60%下降至38.89%。3.家蚕微孢子虫(N.bombycis)经SDS法温和处理脱除表面蛋白后,1%、2%和4%的NaCl溶液分别处理使孢子对家蚕的感染率分别为37.78%、32.11%和16.66%;未经SDS法温和处理的家蚕微孢子虫(N.bombycis)经1%、2%和4%的NaCl溶液分别处理后,对家蚕的感染率分别为60.%、51.11%和67.77%;毒对的感染率为60%。4.家蚕微孢子虫(N.bombycis)经SDS法温和处理脱除表面蛋白后,经35℃、40℃和45℃分别处理两个小时后对家蚕的感染率分别为21.11%、16.66%和11.11%;未经SDS法温和处理的家蚕微孢子虫(N.bombycis)经35℃、40℃和45℃分别处理后,对家蚕的感染率分别为43.33%、37.78%和40%:毒对的感染率为60%。微孢子虫孢子表面蛋白的去除以及相关试验结果表明:微孢子虫表面蛋白具有屏护孢壁“离子通道”的作用,并且孢子的表面蛋白存在与否和孢子的生存和感染性密切相关。二、微孢子虫表面蛋白识别、免疫攻击功能的初步研究1.微孢子虫(N.bombycis)经兔血清处理后对家蚕的感染率分别为79%、82%、87%和82.3%,说明兔血清组的处理时间和洗涤与否对家蚕的感染率基本没有影响。家蚕微孢子虫经兔抗家蚕微孢子虫血清处理半小时后,对家蚕的感染率为75.3%:经兔抗家蚕微孢子虫血清处理1小时后,对家蚕的感染率为64%。毒对的感染率为80.7%。……   
[关键词]:微孢子虫;表面蛋白;生物学功能
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西南农业大学2005年
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