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银杏内生链霉菌HG2393的鉴定及其对小菜蛾的生物活性研究

徐红星

  从浙江杭州、长兴和临安等地银杏产区采集的银杏Ginkgo biloba L.根、茎和叶中所分离到32株内生放线菌,在所有样品的发酵液(即胞外产物)对小菜蛾Plutella xylostella L.幼虫均无杀虫活性,但编号为HG2393菌株的乙醇提取液(即胞内产物)对小菜蛾具有较高的生物活性。本论文对银杏内生链霉菌HG2393菌株进行鉴定,并对发酵条件及其对小菜蛾的生物活性作了初步研究。结果如下:根据形态特征、细胞壁组分测定和16S rDNA序列分析结果表明,菌株HG2393属于链霉菌属。其培养特征、生理生化特性和16S rDNA序列均与灰色链霉菌(Streptomyces griseus)极为相似。但是,HG2393与《放线菌的分类和鉴定》中几种较典型灰色链霉菌在碳源利用等生理生化特征存在显著差异,故认定菌株HG2393为灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的新亚种,定名为灰色链霉菌杭州亚种(Streptomyces griseus subsp. hangzhouensis)。在本文采用的8种不同C/N的培养基,有机质含量较高的6号培养基有利于HG2393菌株产杀虫活性成份。这与大部分抗生素类物质生产菌的发酵情况类似。研究表明,豆饼粉、玉米粉和蛋白胨是影响其发酵的关键因素而较适合的发酵条件为:28℃、初始pH值为6.5、装液量为300ml三角瓶中装80ml培养基。根据菌丝的生长情况及pH值的变化,该菌株在发酵时大体上可分为三个明显的阶段:0-36h为菌丝生长期,48-60h为产物合成期,72h以后为菌丝自溶期。而从对小菜蛾的杀虫效果来看,该菌株的有效组份产量随发酵时间逐渐增大,60h达最高峰,之后由于菌丝自溶及孢子重新萌发等原因,有效组份含量略有变化,因此该菌株的发酵应该在60h左右结束最为合适。HG2393菌丝体丙酮提取物对小菜蛾幼虫的生物活性略高于乙醇提取物,其校正死亡率分别为45.40%和42.22%,但两者无显著差异。而对4龄幼虫的活性显著低于2龄幼虫,校正死亡率分别为16.73%和25.06%,两种提取物之间仍无显著差异。综合考虑杀虫效果、生产成本和安全等因素,认为以85%乙醇作为提取的溶剂较为合适。HG2393菌丝体乙醇粗提物对小菜蛾的作用方式包括拒食活性、生长发育抑制作用和毒杀作用等。在选择性和非选择性条件下,其提取物对小菜蛾幼虫的拒食中浓度(AFC_(50))分别为4824mg/L和25813mg/L,同时随着小……   
[关键词]:银杏;内生放线菌;内生链霉菌;多相分类;16S rDNA;发酵;影响因子;小菜蛾;拒食作用;生长发育抑制作用;毒杀作用
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2005年