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辛伐他汀对心肌缺血再灌注损伤后心功能的影响及其机制探讨

郑霞

  实验背景:临床上有很多种情况会出现心脏暂时性缺血复灌后心功能下降,这些情况包括经皮冠状动脉成形术、不稳定性心绞痛、急性心肌梗死后早期复灌、运动诱导的心肌缺血、心脏手术和心脏移植等。辛伐他汀,一种3-羟基3-甲基戊二栈辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,有报道在急性心肌梗死病人早期应用可以减少一年内的致死率,也有报道辛伐他汀可以加重心功能减低程度,故目前尚不能确定在心肌缺血期或缺血心肌再灌注期应用辛伐他汀的利弊。实验目的:本实验是为了评价急性辛伐他汀应用能否影响正常心脏的舒缩功能,能否对已有缺血再灌注损伤的心脏的舒缩功能产生影响,或者是预先应用辛伐他汀是否可以对心脏产生保护作用,并在此基础上,研究辛伐他汀是否是通过影响心脏的肌浆网钙调蛋白的基因表达或者是通过有关钙转运的Na~+-K~+-ATPase和Ca~(2+)-ATPase酶学活力的改变而产生的对心功能的影响。实验方法:将SD大鼠的心脏取出,逆行灌注于Langendorff装置,随机分为三个大组。A组(正常心脏灌注组):分别给予含0,1,3,10,30,100μmol/L辛伐他汀的改良的Krebs-Henseleit(K-H)液灌注60分钟;B组(缺血再灌注组):缺血15分钟,复灌时给予含0,1,3,10,30,100μmol/L辛伐他汀的改良的K-H液60分钟;C组(辛伐他汀预给药组):预给含0,1,3,10,30μmol/L辛伐他汀的改良的K-H液20分钟,浙江大学博士学位论文然后给子15分钟缺血损伤和60分钟改良的K一日液再灌。记录心脏收缩舒张功能指标([-v[>I,:左,心室发展压:+dp/dt max和一dp/dt max:心室收缩舒张最大速率)。培养心室肌细胞.分为正常心肌细胞辛伐他汀孵育组(含。,l,3,10,30,100林mol/L辛伐他汀的改良的K一H液孵育组)和缺血再灌注(缺血30分钟,复灌60分钟或24小时),二肌细胞辛伐他汀孵育组(含0.!,3,10,30,!00林mol/L辛伐他汀的改良的K一H液孵育组)。抽提心脏组织和心肌细胞的mRNA,用RT-PCR方法检测几种钙调蛋白(sareoendop一as一nie retieulum eaZ+ATPaseZ(sEReAZ),phosplloxamba一、(PLB),i一lositoll,4,5一trisphosphate reeeptor:(IP3RZ)‘和ryanodine reeeptorZ(RyRZ))的InRNA的变化。裂解心脏组织和心肌细胞的蛋白,用Westenl Blot方法测定这几种钙调蛋白(s ERCAZ、pLB、IP3R:和RyRZ)的蛋白表达的变化。同时应用MTT方法测定心肌细胞的存活率。用分光光度法测定离体心脏肌膜Na+一K+一ATPase.肌浆网eaZ几灯Pase,肌酸激酶(ereatine ki::ase(eK))以及线粒体Na气K气‘I’Pase和CaZ一八丁PaS。酶学变化。实验结果: l)缺血再灌注损伤对,二功能和钙调蛋白的影响: 缺血再灌注组大鼠心脏舒缩功能指标(LVDI)%、十dp/d tlllax%和一dP/dtma、%)较正常组显著下降,同时SERc八2、IP3RZ和RyR:基因和蛋白水平均出现明显减低,而PLI3的水平无任何改变。 2)辛伐他汀对心功能的影响: 对于正常离体心脏,3一30卜mol几的辛伐他汀作用可以提高,“脏舒缩功能的指标,!00阴1101/[.的辛伐他汀贝11导致短时间心脏碎死。同时,10,30林mol/l.的辛伐他汀明显提高冠脉流量,3叩m浏1一以上浓度的辛伐他汀明显降低心率。 对于缺血再灌注损伤的心脏,3一30林mol几的辛伐他汀可以明显保护损伤的,“脏舒缩功能,而l0()脚二l/l一的辛伐他汀却使本已受损的心功能进一步恶化。冠脉浙江大学博士学位论文流量在!O,30林mol/L的辛伐他汀的影响下明显提高,30卜mol/L以上浓度的辛伐他汀同样明显降低心率。 预给药组,只有3卜mol几的辛伐他汀能产生提高心脏舒缩功能的作用,而冠脉流量和,公率均无任何改变。 3)辛伐他汀对钙调蛋白的影响: 正常心脏:对于正常离体心脏和培养的心肌细胞,3一30林m。!几辛伐他汀作用60分钟后,SERCA:和RyR:mRNA的表达水平可以显著升高,!00林mol几辛伐他汀仅使孵育60分钟的培养,心肌细胞SERCA:和RyR:mRNA提高,蛋白水平在上述条件下均无变化。培养细胞中,辛伐他汀作用时间延长到24小时,蛋白水平也相应提高。PLB与!P3R:则mRNA和蛋白水平均未改变。 缺血再灌注损伤心脏:对缺血再灌注损伤的离体心脏和培养的心肌细胞,3一30脚二l/L辛伐他汀作用60分钟后,SERCA:和RyR:mRNA和蛋白的表达水平均有提高,甚至100林mol/[一辛伐他汀可以在培养的心肌细胞中产生同样的效果,而PLB和IP3R:未产生任何变化。 4)辛伐他汀对月’Pase和,心肌细胞损伤的影响: APr Pase:辛伐他汀对正常离体心脏肌膜Na+一K十一ATPase和肌浆网caZ几ATI,ase活性均未产生任何影响。同样,对于缺血再灌注,“脏肌膜的Na+一K+一AT Pase的活性亦未有明显的影响,但是3一30林m。!几辛伐他汀可以明显提高缺血再灌注,“脏的肌浆网caZ卜一A-l’Pase活性,100脚二。l/L辛伐他汀却产生相反的作用;对于正常的线粒体Na气厂一ATPase,辛伐他汀同样未能产生任何影响,而线粒体caZ几AT‘Pase活性也只有100协mol/L辛伐他汀的浓度下才出现抑制作用。在3一30即101/[的辛伐他汀组能明显增加缺血再灌注心肌线粒体Na气K+一ATP酶和caZ气ATP酶的活性,而100阴二l/l一的辛伐他汀组却明显减弱了缺血再灌注心肌线粒体Na气K+一ATP酶和caZ斗一ATP酶的活性。 cK:!00川nol/1二辛伐他汀可以明?……   
[关键词]:缺血再灌注损伤;肌浆网;心肌细胞;他汀类药物;Simvastatin;机制探讨
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:浙江大学2005年
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