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非洲菊(Gerbera Hybrida)再生和转化体系的建立与优化

张妙彬

  非洲菊(Gerbera hybrida)为世界六大切花之一,也是重要的盆栽花卉。由于各种病毒、微生物和害虫的侵害以及本身的耐热性、耐冷性不高,使非洲菊的品质提高受到很大限制。利用组织培养结合基因工程技术是一种具有前景的育种方法。前人的研究表明,非洲菊不定芽再生频率因品种不同而有很大差异。非洲菊深圳5号(S5) 花色鲜艳,但组培中的愈伤组织诱导和植株再生系统的建立比较困难。尽管非洲菊转基因工作国际上已有报道,但再生途径还不完善,导致转化效率很低,国内目前还只是处于转化条件摸索的阶段,尚未有实质性突破的报道。针对以上问题,本研究采用S5为实验材料,进行再生和转化体系的建立和优化,获得了以下主要结果:建立了两种S5不定芽再生体系。研究表明附加有较高浓度BA、NAA和IAA的1/2MS2培养基对于S5花托的愈伤组织以及不定芽诱导效果最好。YY10培养基则最适于从单芽基部切口处直接诱导出丛生芽。而且后者适宜做为转化受体的再生途径。通过根癌农杆菌介导法建立了非洲菊遗传转化体系。通过测定GUS基因的瞬时表达率和抗性芽发生频率,研究影响根癌农杆菌转化非洲菊S5的主要因素。结果表明:菌液浓度OD600为0. 4-0. 5,侵染时间为10min,共培养时间为3d的处理是最佳组合,GUS的瞬时表达率(20%)以及抗性芽的发生频率(20%)最高;农杆菌在植物诱导培养基中预培养2h为宜;农杆菌YEB菌液先培养24h,再转部分菌液到新鲜YEB培养基中继续培养12h后转化效果最好;在植物诱导培养基和共培养基上都添加AS且浓度为20 mg/L可以较好地活化农杆菌,提高转化效率。对抗性芽进行GUS的稳定性表达、PCR以及Southern杂交检测,结果表明:经Hyg反复筛选得到12株抗性芽经GUS染色检测全为阳性;其中9株来自上述的同一个最佳试验组合,平均转化率为7. 43%。这9株GUS阳性抗性芽经PCR扩增、Southern杂交检测,证实外源基因已整合进植物基因组。……   
[关键词]:非洲菊;再生;转基因;GUS;分子杂交
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华南师范大学2005年