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马铃薯花粉原生质体分离与培养

吴旺泽

  实验采用6个优良四倍体栽培种和3个双单倍体不同发育时期的花粉为供试材料,研究花粉原生质体分离与培养的技术体系,取得如下结果:1.对不同发育时期的花粉经低温和甘露醇处理后,进行培养,其中单核期幼嫩花粉培养后脱分化频率达4.1%,具有孢子体发育的巨大潜力。四分体时期的花粉培养后不能启动分裂;成熟花粉培养后易趋向于配子体发育方向。2.四分体时期的花粉经低温处理5~7d后,在0.3mol/l的蔗糖做渗透压调节剂,1%蜗牛酶+0.5%崩溃酶+1.2%纤维素酶的混合酶液中,四分体原生质体分离率最高达74.2%,在K3改良培养基+1mg/l 2,4-D+0.2mg/l 6-BA+1mg/l NAA+800 mg/l谷氨酰胺+100mg/l丝氨酸+0.1%小牛血清的培养基中培养1d后再生细胞壁,2~3d后再生细胞壁的原生质体启动第一次分裂,分裂频率最高达14.2%,培养10~15d后,无组织生长的细胞最后增殖生成细胞团。3.单核期幼嫩花粉先经饥饿处理,再经低温水合、高温热激、渗激多步冲击的方法制备了马铃薯脱外壁花粉,Favorita最高脱壁率达34.5%;对脱外壁花粉进行了离体人工萌发,最高萌发率达38.3%。脱外壁花粉在0.6mol/l甘露醇+0.2mol/l山梨醇做渗透压的酶液中,花粉原生质体最高分离率达24.3%,质体培养1~2d后再生细胞壁,3d后再生细胞壁加厚,个别原生质体膨大后表现出孢子体发育迹象。4.马铃薯花粉离体萌发研究结果表明,在10%蔗糖+10%PEG(8000)+0.02%Ca(NO3)2+0.02%H3BO3+0.5mmol/l K+的培养基上马铃薯花粉萌发率最高达83.4%,添加低浓度的Na+,6-BA能促进花粉萌发和花粉管伸长。5.针对马铃薯成熟花粉的特点建立了“低温—萌发—酶解”的花粉原生质体分离方法。低温处理5~7d的材料,在萌发液中萌发30min后在0.8mol/l甘露醇+0.2mol/l山梨醇渗透压调节剂下,在添加有K3培养基大量和微量元素或13mol/l的CPW盐离子的酶液中,原生质体分离率达24.7%。6.当花粉管长到约2~3mm后,转入酶液后1~2h就可观察到花粉粒发生质壁分离,4~5h后花粉管亚原生质体被释放。花粉管亚原生质体大小差别较大,大的直径约50~60μm,小的约10μm,刚分离的亚原生质体易自发融合,培养1d后再生细胞壁。……   
[关键词]:马铃薯;花粉原生质体;脱外壁花粉;离体萌发;
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2004年