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脂肪中表达的基因StARD4,StARD6,RNPC3的研究

赵恩鹏

  为了研究胆固醇合成和代谢的基因及其表达,我们利用抑制消减杂交方法建立了 C57 小鼠在加胆固醇食物的条件下的差减文库。经过筛选和测序,我们在脂肪文库中得到了几个独立的克隆,其中的两个是 StARD4(AF480297)和StARD6(AF480303),另一个克隆对应的人类同源基因是 RNPC3。以前报道 StARD4 只在肝脏中表达,而且在加胆固醇的条件下表达水平下降。StARD6 只在睾丸中表达。我们首次发现 StARD4 和 StARD6 在脂肪组织中也有表达,并且在加胆固醇的条件下表达水平下降。并在脂肪组织中发现了 StARD4 的一种剪切形式造成 ORF 的改变;StARD6 至少有两种种剪切形式。其它含 START地结构域能结合固醇。在脂肪组织中新发现 StARD4 和 StARD6 所有的剪切体都破坏了 START 结构域,提示 StARD4(AF480297)和 StARD6(AF480303)是结合胆固醇最重要的剪切形式。StARD4 和 StARD6 在 3T3L1 细胞的分化中,没有显著的表达变化。我们首次成 功 地 构 建 了 表 达 StARD4 的 腺 病 毒 载 体 AD-Psuhttle-mStARD4 , 用AD-Psuhttle-mStARD4 感染 3T3L1 细胞后发现 StARD4 有促进细胞胆固醇合成的作用。用软件预测了人的 StARD4 和人的 StARD6 和小鼠的 StARD4 可能的启动子序列,将它们装到 pGLBasic 报告基因地质粒上转染 AD293 细胞,实验结果显示它们的启动子有一定的活性。在 SSH 的脂肪库中发现了一个小鼠的 cDNA 片断,这个 cDNA 片断对应小鼠的一条基因,它的基因号为 NM_026043。在 NCBI 上没有发现这条基因对应的人类基因,但在我们实验室建立的人类基因文库中有这条基因。这是这个基因的首次报道。我们将这条基因登陆到 NCBI 上,并经过人类研究命名委员会同意命名为RNPC3。RNPC3全长为1870bp,由14个外显子组成,定位在1p21。从101bp到1654bp有一个开放阅读框,编码一个 517 氨基酸的蛋白质。RNPC3 含有两个 RRM 结构域、两个双核定位信号和一个多聚脯氨酸区。RNPC3 定位在细胞核中,多组织表达谱分析发现 RNPC3 主要分布在肾脏和胰腺中。……   
[关键词]:抑制差减杂交;脂肪组织;StARD4;StARD6;RNPC3;腺病毒载体;启动子;RNA 识别序基
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:复旦大学2004年