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灰树花多糖GF4A的结构及化学修饰研究

王莹

  灰树花(Grifola frondosa)是一种名贵的食用真菌,具有抗癌、抗病毒以及提高人体免疫功能等多种药理活性。本文以灰树花发酵菌丝体为原料,通过各种提取分离和纯化技术,获得了一种水不溶性多糖组分GF4A,采用各种化学分析以及现代仪器分析技术确定了它的一级结构,并对其进行了化学修饰,进而初步评价了一衍生物的活性。灰树花发酵菌丝体采用乙醇、沸水、冷碱、热碱等方法依次进行提取,对得到的冷碱和热碱提取水不溶性组分GFM2和GFM5分别进行了性质考察。从糖含量较高的GFM2组分中进一步纯化得一纯品多糖GF4A。经凝胶柱层析检测其纯度较高,并测得其重均分子量约为109kD,糖含量为95.4%。在以上对GF4A的基本理化性质进行测定的基础上,运用化学分析方法(全水解、薄层层析、气相色谱、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化反应、选择性乙酰解、刚果红结合反应等)和波谱学方法(红外光谱、紫外光谱、核磁共振波谱等)对其结构进行了研究,确定了GF4A的主链结构,糖基组成及分支情况,并根据对各个实验结果的分析提出了其可能的结构单元。结果表明:GF4A是一种由Glc、Man、Xyl(9∶2∶1)组成的多分支结构。主链由α-1,3- D-Glc和α-1,3-D-Man构成核心结构,两者比例约为3∶1;每8个糖残基构成一个结构重复单元,其中六个为α-1,3-D-Glc,两个为α-1,3-D-Man;α-1,3-D-Glc在O-4位有两个分支,α-1,3-D-Man上无分支;一分支为三个β-1,4连接的Glc,另一分支为一α-1,4连接的Xyl;GF4A不具有超螺旋结构。为改善GF4A的溶解性,选用了羧甲基化和硫酸酯化两种方法对其进行化学修饰,产物经纯化后制备得到两个衍生化多糖样品CGF4A和SGF4A。分别对其进行性质考察,测定其分子量分别为114kD、217kD。CGF4A的羧甲基度为1.55,SGF4A的硫酸基取代度为0.97。UV和IR光谱扫描可见羧甲基和硫酸基的特征吸收,证明衍生方法是成功的。本文进一步对SGF4A从事了小鼠移植性肿瘤免疫和抑瘤活性研究,以肿瘤动物模型S 180测定不同剂量下SGF4A的肿瘤抑制率,胸腺指数,脾指数。证明其活性优于香菇多糖对照品,有较好的抗肿瘤活性和免疫增强活性。本文通过系统的对一种冷碱提取水不溶性灰树花多糖GF4A的提取、分离纯化、结构鉴定、化学修饰及衍生物活性进行研究,为进一步从事灰树花多糖的构效关系研究提供了重要的结构信息,同时也对其它真菌多糖的研究开发提供了借鉴。本研究也表明硫酸酷化灰树花多糖SGF4A有较好的抗肿瘤和增强免疫力的活性,符合抗癌新药筛选标准,是一种值得深入研究的,有开发前景的抗肿瘤药物。……   
[关键词]:灰树花;多糖;提取;结构;硫酸醋化;羧甲基化;活性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国海洋大学2004年