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蛋白激酶C同工酶在大鼠实验性脑出血时表达及西比灵的干预机制

李玲

  背景及目的:脑出血后继发性脑损害的病理生理机制较为复杂,是多因素综合作用的结果。由于对脑出血后神经损伤的病理生理机制缺乏深入研究,故目前脑出血临床治疗方法主要是降低颅高压及防止出血后并发症,而对出血后血肿周围神经细胞损伤尚无有效治疗手段。目前已经发现一些因素参与脑出血后神经损伤如凝血酶原活性的增加、红细胞代谢产物的释放、脑血流量的下降、血肿的机械压迫等。既往的研究表明,许多病理过程(如缺血/再灌流)可以诱导细胞信号转导的异常。细胞信号转导的异常介导了病理条件下的神经元损伤,可以引起神经元的坏死和/或凋亡。而在细胞信号转导异常中,蛋白激酶的异常起着重要的作用。有关研究表明脑出血周围水肿形成与出血灶周围的脑缺血有关,提示血肿周围存在缺血/再灌流等病理过程。因此我们设想,脑出血条件下,是否也由于某些因素触发了出血灶周围神经元细胞信号转导的异常,从而导致了血肿周围神经元的损伤呢?这一问题的研究现国内外仍未见报道。目前国内外研究发现脑出血后神经元损伤主要与下列因素有关,如凝血酶原活性的增加、红细胞代谢产物的释放、脑血流量的下降、血肿的机械压迫等。故本实验旨在从细胞信号转导途径为突破口探讨血肿周围神经元损伤的机理及干预,为临床脑出血的治疗提供新的理论依据。传统的观念认为,钙通道阻滞剂可以引起血管的扩张,从而诱发血肿的扩大及加重脑水肿,从而限制了钙通道阻滞剂在脑出血中的应用。但已有研究证实钙超载是导致缺血性脑损伤的重要因素,决定了钙通道阻滞剂作为细胞保护剂的重要位置。所以本实验选择西比灵作为干预药物,进一步评价钙通道阻滞剂在脑出血中的作用。方法:参照Rosenberg法以胶原酶法制得Wistar大鼠基底节区出血模型,应用神经病理、免疫组化、TUNEL法、Fura-2荧光探针法及电生理等技术,观察脑出血后不同时相点蛋白激酶C同工酶表达、细胞内游离钙变化与血肿周围神经元凋亡、神经功能缺失变化之间的关系,同时观察钙通道阻滞剂西比灵对上述指标的影响。 结果:1. 蛋白激酶C同工酶在实验性脑出血大鼠脑组织中大量表达,主要分布于海马,皮层等脑区,以出血周围区明显;2. 脑出血后血肿周围细胞内游离钙浓度增高,并具有时点特异性:出血后0.5h[Ca2+]i明显升高(P<0.01),出血后6h、24h显著升高,72h呈下降趋势,120h明显下降但仍高于出血前水平;3. 脑出血后血肿周围凋亡细胞表达增高,0.5h开始升高,72h达高峰;4. 西比灵对脑出血后血肿周围细胞内游离钙超载及两种PKC同工酶表达上调及凋亡细胞高表达有明显抑制作用, 同时明显改善出血后体感诱发电位P1-N1峰峰波幅降低及P1-N1潜伏期延长,其结果有显著差异性。结论1. 实验性脑出血可诱导血肿周围神经元PKC表达上调且具有同工酶特异性。PKC上调机理尚不清楚,可能与出血灶周围缺血缺氧等有关。2.脑出血后PKC表达上调及胞内钙超载与凋亡现象成正相关,表明脑细胞信号转导途径参与脑出血后神经元损伤的病理生理改变。3.西比灵对细胞内游离钙及两种PKC同工酶表达及凋亡细胞表达有明显抑制作用,对脑出血动物神经功能缺失有明显的修复作用,对实验性脑出血神经元损伤起保护作用。.……   
[关键词]:脑出血;蛋白激酶C;凋亡;细胞内游离钙;西比灵-钙通道阻滞剂
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第三军医大学2004年
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