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SpA与HLA-B27等位基因相关性研究及分型基因微阵列的研制

李维

  研究背景:血清阴性脊柱关节病(Seronegative Spondyloarthropathy)或称脊柱关节病(Spondyloarthropathy,SpA)是一组以血清类风湿因子(Rheumatoid Factor,RF)阴性为特点的相互关联的多系统炎症性疾病。在SpA范畴内,目前已认识的疾病包括SpA的原型——强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)以及反应性关节炎(ReactiveArthritis,ReA)、瑞特氏综合征(Riter s Syndrome,RS)、银屑病性关节炎(Psoriasis Arthritis,PsA)、炎性肠病性关节病(Inflammatory Bowel Diseases Arthritis,IBDA)、幼年脊柱关节病(Junior Spondyloarthropathy,JSpA)、Whipple病(肠道脂质障碍病)、SAPHO综合征(Synoritis滑膜炎,Aene痤疮,Pustulosis脓疱,Hyperostosis骨肥厚and Osteitis骨炎综合征)、白塞氏病(Behcet s Disease,BD)和未分化脊柱关节病(UndifferentiatedSpondyloarthropathy,uSpA)等。在过去的20多年里,与Spa发病相关的机制研究表明,遗传是这些疾病的主要致病因素,B27是其中最基本和最重要的易感相关基因,所有这类疾病虽病理特征及临床表现各有特点,但都不同程度地与HLA-B27相关,其中以AS最为显著,但作用机制至今不明。HLA-B27血清型包括26个不同的等位基因(亚型)和24个不同的蛋白质产物:HLA-B~* 2701~B~*2725,B~*2722除外。2002年4月世界卫生组织(World HealthOrganization,WHO)宣布废除HLA-B~*2722,因为参比细胞已证实B~*2722的序列与B~*2706完全一致。B27不同的等位基因之间仅有一个或几个氨基酸的差异,而且差异多集中在2,3外显子的α 1和α 2区域内。在人群中分布最广的等位基因是B~*2705,与AS及spa相关联的等位基因有:B~*2702,B~*2704和B~*2705;在东南亚人群中分布的B~*2706和在撒丁岛人群中分布的B~*2709被证实与AS疾病不相关。AS疾病相关等位基因和不相关等位基因的差异为研究HLA-B27在AS发病机理中的作用提供了线索。目前国内外检测HLA-B27多采用经典的血清学方法——微量淋巴毒实验(Microlymphocytotoxicity Test,MCLT),流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)以及序列特异性引物PCR(PCR-SSP,PCR-Sequence Specific Primer)和顺序特异性寡核苷酸第三军医大学博士学位论文PcR口cR-sso,PcR- sequence sPecific oligonucleotide)等基因分型技术,DNA微阵列(DNAaJ比ay)技术与这些技术相比,具有分辨率高、稳定性好和快速、准确等优点,对研究HLA-B27基因多态性及AS家系具有十分重要的临床意义。因此建立高分辨的HLA.B27分型基因微阵列技术,检测分析中国重庆地区汉族健康人群和sPA人群中HLA一B27基因多态性的分布频率及其家系分析,不仅有助于了解其发病机理,探索HLA一27与sPA的关联机制,而且对于以As为代表的spA的早期诊断、鉴别诊断、早期治疗、预防、和预后判断都有重要的临床价值。目的:1.初步了解SPA在中国重庆地区汉族人群中的发病率;HLA一B27抗原、基因在正常人群和SPA病人中的分布频率;HLA一B27等位基因的多态性分布特点;并以期发现不同于其他国家、地区和种族的罕见或新的B27等位基因;同时通过检测AS家系中B27抗原表达的阳性率和等位基因的多态性分布来探寻B27在AS多基因疾病中的作用,辅助AS的早期诊断、预防和预后判断。2.检测分析中国重庆地区HLA一B27抗原阳性病例组与正常对照组血管紧张素转换酶(An giotensinc。示e比访9 E工汀me,AcE)等位基因多态性的分布特点,探寻AcE基因多态性与B27抗原阳性强直性脊柱炎(AS)的相关性。3.对检测HLA一B27抗原和基因表达的MCLT、FCM、PCR-SSO、PCR-SSP、SBT和基因微阵列等技术进行方法学评估。4.建立HLA一B27等位基因微阵列新技术,作为适于临床应用的可进行大规模筛查SpA的首选工具。5.建立HLA一B27等位基因三维结构差异判断标准和数据库。研究对象:从2002年8月到2003年8月,我们对在重庆市西南医院中医科和其他各大医院免疫风湿科就诊的387名疑似sPA病人进行了HLA.B27抗原筛查,其中146例确诊sPA,141例HL入一B27抗原表达阳性患者就诊年龄介于4岁一57岁之间,平均年龄为29.1岁。男性110例,平均年龄为29.2岁,女性31例,平均年龄为28.7岁,男女之比为3.7:1,病程1个月一47年,临床症状均符合1991年的Amor诊断标准。其中AS102例(72.34%),ReA 25例(17.73%),JspA3例(2.13%),uSPA 10例(7.09%),PsAI例(0.71%)。150例正常对照为中国重庆地区无血缘关系的随机健康献血者。AS家系的患者及其一级或二、三级家庭成员均进行HLA一B27抗原检测、基因检定及等位基因分型。收集所有研究对象的外周血标本(3场ml),以ACD或EDTA抗凝,尽量避免以肝素抗凝。方法::;第三军医大学博士学位论文1.用MCLT和FCM方法筛查HLA.B27抗原的表达。2.抽提研究对象的外周血基因组DNA(。mega E.z.N.A Blood DNA肋,美国);并以PCR方法检测HLA.B27基因的表达(G&T HLA.B27Geno协p吨儿t,美国)。3.以PCR-ssP方法(GenO vision高分辨众,瑞典)和PCR-SSO方法(D”al中低分辨幻t,英国)检测HLA.B27等位基因的表达。4.对30例……   
[关键词]:脊柱关节病;强直性脊柱炎;HLA;等位基因;DNA;微阵列;基因分型
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:第三军医大学2004年