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不同日龄仔猪抗菌肽和乳铁蛋白基因表达的差异及断奶日龄对其基因表达影响的研究

韩菲菲

  本课题分别以1、14、28、42、56日龄仔猪和21日龄、28日龄、35日龄断奶仔猪为试验对象,以半定量RT-PCR法为检测手段,研究不同日龄仔猪抗菌肽PR-39、Protegrin-1和乳铁蛋白(Lactoferrin)基因表达的差异以及断奶日龄对仔猪抗菌肽PR-39、Protegrin-1和Lactoferrin基因表达的影响。根据已报道的猪PR-39、Protegrin-1、Lactoferrin和内标β-actin基因序列,设计抗菌肽(蛋白)和β-actin的引物,分别以骨髓和十二指肠mRNA为模板,经反转录和PCR,克隆得到了相应的抗菌肽PR-39、Protegrin-1,乳铁蛋白Lactoferrin以及内标β-actin的基因片断。对测序结果进行序列分析表明,得到的PR-39、Protegrin-1、Lactoferrin和β-actin基因的序列与Genebank登陆的相应基因片断(登录号分别为L23825、X79868、M81327和BC067141)同源性分别为100%、99%、99%和91%。以抗菌肽(蛋白)和内标β-actin基因的成功克隆为基础,本试验探讨了PCR体系中适宜的退火温度、MgCl_2浓度和循环次数,构建了适合于相应基因序列的优化半定量RT-PCR法,用于仔猪抗菌肽(蛋白)基因mRNA表达量的测定。试验1:选取胎次相同、出生体重相近的1、14、28、42和56日龄杜长嘉小母猪各3头,屠宰后取骨髓和十二指肠组织分别用于检测仔猪抗菌肽PR-39、Protegrin-1和Lactoferrin基因在不同日龄时表达的差异;试验2:选取3窝胎次相同,出生体重相近的出生仔猪,分别在21日龄、28日龄和35日龄断奶。在断奶当天和断奶后一周各取3头仔猪,屠宰取骨髓和十二指肠组织,所取样品用于检测断奶日龄对抗菌肽和Lactoferrin基因表达的影响。试验1结果表明,仔猪骨髓抗菌肽PR-39、Protegrin-1的表达量随着日龄的变化而发生变化,且两种抗菌肽表达量的变化趋势是一致的。在断奶前(1-28日龄)其表达量呈现逐渐增加趋势;在断奶后(28-42日龄)其表达量发生显著下降(P<0.05);其后(42-56日龄),抗菌肽的表达又有所回升;十二指肠中Lactoferrin基因的表达量中文摘要在仔猪出生时最高,其后随着日龄的增加,Lactofe州n表达量逐渐降低,56日龄时的表达量最低:此外,Lactofe币n基因的表达量在断奶后(28一42日龄)的降低水平尤其显著(p<0.05)。试验2结果表明,断奶对抗菌肤和乳铁蛋白基因的表达均产生显著的影响。不同断奶日龄的仔猪,在断奶后1周与断奶时相比,断奶均显著降低了抗菌肤和Lactoferrin基因的表达。21日龄断奶的仔猪,其PR一39、Protegrin-1和Lactofe州n基因的表达在28日龄比21日龄分别降低了38%,34%和77%(p<0.05);28日龄断奶的仔猪,其PR一39、Proteghn一1和Lactofe币n基因的表达在35日龄比28日龄分别降低了46%,51%和53%(p<0.05);35日龄断奶的仔猪,其pR一39、proteghn一1和Lactoferrin基因的表达在42日龄比35日龄分别降低了50%,49%和59%(p<0.05)。……   
[关键词]:仔猪;抗菌肤;乳铁蛋白;断奶日龄;RT-PCR;基因;克隆;表达
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2004年