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规模化猪场猪圆环病毒2型感染的PCR检测及四川病毒株的分离鉴定

李进

  猪圆环病毒(PCV)的开放阅读框2(ORF2)是其主要结构蛋白(Cap)的编码基因,也是区分猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的重要基因,本研究参照GenBank已发表的15株PCV2基因序列,设计合成一对引物,对PCV2的ORF2基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳,呈现一条大小约0.67kb的特异条带,经条件筛选,建立了猪病料中PCV2感染的PCR检测方法。采用建立的PCR方法对四川9个规模化猪场104头猪的病料进行PCV2检测,结果表明,受检猪的组织及血清样品中PCV2的总检出率为77.9%,证实四川规模化猪场存在PCV2感染。对PCV2感染猪的症状及病理变化进行观察,结果表明,患猪主要表现为仔猪生长不良、腹泻及怀孕母猪流产等症状,患猪精神不振、消瘦,发生黄疸。剖检可见全身淋巴结显著肿大,肺脏出血、水肿以及发生肉样变等病理损伤,病理组织学观察发现组织器官内淋巴细胞减少,生发中心内淋巴细胞消失,在巨嗜细胞内发现嗜碱性包涵体。将PCR检测为阳性的病料接种PK15细胞,盲传6代后进行电镜观察,结果在PK15细胞的细胞核及细胞质中发现包涵体。细胞质中包涵体电子密度深,位于核膜周围,内有呈晶格状排列的病毒粒子,直径12±2nm;细胞核内染色质消散,在细胞核内发现多个电子密度深的、圆形或环状、由大量异染色质组成的包涵体,内有细微的粒状物质。分离鉴定获得PCV2四川毒株1株。将病毒在PK15细胞上传6代后,提取病毒DNA,设计引物扩增全序列,并进行全基因组序列的测定与分析。结果表明病毒的全基因组为1767bp,与国内外分离毒株(15株)的全基因组序列比较发现,该分离株与我国湖南分离株(AY556477)的同源率为97.5%,与欧洲、美洲、南非毒株的同源率在94.2-96%之间。本研究建立了针对PCV2 ORF2基因的PCR检测方法,可对病料、血清提取DNA进行检测,在7小时内得出结果。该方法可用于PCV2感染猪的快速诊断,可用于PCV2感染的流行病学调查、引种检疫等。本研究丰富了我国PCV2感染的流行病学资料,为规模化猪场有效诊断防治猪圆环病毒病提供了科学依据。……   
[关键词]:猪圆环病毒2型;PCR检测;全基因组测序
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2004年