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壳聚糖/卵透明带DNA口服避孕疫苗的研究

孙彩军

  为探讨卵透明带DNA疫苗诱发输卵管局部粘膜免疫以阻断受精从而避免全身性免疫引起卵巢功能紊乱的可行性,本研究首先采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3 α(pZP3 α)的cDNA序列片段,以用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3 α。通过脂质体转染将之导入HeLa细胞进行体外瞬时表达,采用RT-PCR和间接免疫荧光技术(IIF)检测到了pZP3 α在HeLa细胞中的表达。然后,用壳聚糖C390包裹pVAX1-pZP3 α重组质粒成功制备成纳米微球,用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微球的形态结构,其直径为100纳米到300纳米不等,平均为224.6nm,形状为球形、椭圆形等,并且测定微球对重组质粒DNA的包裹率达90%以上。将该微球体外转染HeLa细胞,用IIF法检测到了pZP3 α的表达。接着,以灌胃方式将这些DNA疫苗微球喂食小鼠,喂食五天后通过RT-PCR和IIF检测到了此DNA疫苗在小鼠小肠粘膜层细胞中的表达。壳聚糖/pVAX1-pZP3 α微球口服免疫小鼠后可以激发抗ZP3 IgA抗体反应,在免疫后第二周小鼠血清中出现明显的抗体反应,在第四周抗体滴度开始迅速升高,在第10-11周滴度达到最高值,随后又开始下降。较高水平的抗体大概可以维持6-7周。在阴道分泌物中也能检测到抗ZP3 IgA抗体反应。抗生育实验显示避孕率为50%,而且这种抗生育作用与交配时的抗ZP3 IgA抗体滴度有关。小鼠的卵巢切片观察表明免疫组中有抗生育效果小鼠的卵巢组织可看到包括原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡等各级形态正常的卵泡,无淋巴细胞浸润,与对照组小鼠的卵巢结构无差异。本研究的结果初步表明壳聚糖/pVAX1-pZP3 α纳米微球疫苗能诱发生殖道粘膜免疫反应,产生抗生育作用,同时对小鼠的卵巢组织结构无影响,这为进一步发展更安全、方便、有效的口服卵透明带避孕疫苗提供了有参考价值的资料。……   
[关键词]:卵透明带;DNA疫苗;免疫避孕;粘膜免疫;壳聚糖;纳米微球
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:暨南大学2004年