手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

血清可溶性HLA-I及肝组织HLA-I表达水平与乙型病毒性肝炎的临床相关性研究

周东方

  目的:本实验以病毒性肝炎患者肝组织和血清的人白细胞抗原I类分子(Human lymphocyte antigen I,HLA-I)为研究对象,观察病毒性肝炎不同阶段HLA-I在肝细胞表达情况及血清水平,探讨HLA-I与慢性病毒性肝炎的发生、发展及转归的关系,对探索乙肝慢性化以及免疫耐受的形成提供线索,对目前抗病毒药物的治疗效果进行预测提供参考。方法:入选标本96例,试验组86例,对照组10例。随机选取 86例乙型病毒性肝炎患者,其中男性71例,女性15例,年龄10~71岁(32.4±15.1岁)。按照2000年全国第十次病毒性肝炎及肝病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》[1]的诊断标准,其中急性肝炎10例,慢性肝炎轻度20例,慢性肝炎中度22例,慢性肝炎重度20例,肝炎肝硬化14例。对照组10例来自健康献血员。合并甲、丙、丁、戊、庚等其他肝炎病毒感染、合并酒精性肝病及药物性肝病、合并肿瘤、自身免疫性疾病的标本均被剔除。86例患者中27例于入院后行肝穿刺组织活检,肝组织标本即刻用10%中性甲醛固定,24小时后石蜡包埋保存。肝穿前后2日内抽取空腹不抗凝静脉血,离心后取血清置于-20℃冰箱保存。除肝穿者外,其余59例患者只于入院后2日抽取空腹不抗凝静脉血,分离留取血清标本,-20℃冰箱保存。肝组织标本进行常规HE染色及HLA-I的免疫组化染色,并应用JVCKY-F30B3-CCD摄像头采集图像,北京航空航天工业大学CM-2000B型多媒体真彩色图文分析系统对肝脏HLA-I分子进行图像分析定量。血清标本用酶联免疫法检测血清可溶性HLA-I(soluble HLA-I,sHLA-I)分子的血清水平,用日本Olympus2700全自动生化分析仪检测肝功能,用ELISA法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg 、抗-HBe、抗-HBc的定量,应用PCR法检测HBVDNA的定量。统计学处理采用SPSS10.0版统计软件。结果:(1)肝组织HLA-I免疫组化染色观察结果及图像分析结果:HLA-I染色阳性物质呈棕黄色,以核型、胞浆型、胞膜型三种形式存在。G0期肝实质细胞未见阳性物质,G1-4期肝细胞阳性物质呈弥漫性表达,且随炎症活动度的加强着色逐渐加深。图像分析HLA-I分子光密度,G1~G4组与G0组比较均有显著性差异(P<0.05)。G1~G4组间比较,除G2和G3组外(P>.05),其余各组组间比较差异均具有显著性(P<0.05)。按纤维化程度分组,S1、S2、S3组的肝组织HLA-I的表达较S0组明显增加,S4组表达最弱。(2)肝组织HLA-I水平与血清HLA-I浓度呈正相关,相关系数0.756。(3)血清HLA-I与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)之间呈现明显正相关(P值均<0.01),与白蛋白(ALB)、胆碱酯酶(ChE)、凝血酶原活动度(PTA)均呈负相关(P值均<0.05)。(4)在慢性肝炎患者随慢性肝炎轻度、慢性肝炎中度、慢性肝炎重度肝组织HLA-I表达逐渐增加,而肝炎肝硬化患者肝组织HLA-I表达则有较大差异,活动性肝硬化高于静止性肝硬化。急性肝炎患者因无肝组织标本而未作出分析。(5)sHLA-I水平以急性肝炎组为最高,慢性肝炎组则随慢性肝炎轻、中、重度逐渐增高。肝炎肝硬化组低于急、慢性肝炎患者。表明在急性肝炎患者,机体免疫反应最强烈,肝细胞损伤程度也较强;而在慢性肝炎及肝硬化患者机体免疫反应则相对较弱,不足以将肝细胞内的HBV清除,造成疾病迁延不愈。(6)将入选标本分为HBeAg(+)/HBVDNA(+)组和抗-HBe(+)/HBVDNA(+)组,其中HBeAg(+)/HBVDNA(+)组患者肝组织标本HLA-I和sHLA-I水平均低于抗-HBe(+)/HBVDNA(+)组,但两组比较差异无显著性(P值分别为0.405和0.285)。结论:通过肝组织HLA-I免疫组化染色,观察到慢性肝炎的不同阶段肝实质细胞可不同程度产生和表达HLA-I抗原,表达强度随肝脏炎症活动度的增加而增强。(1)通过检测血清的sHLA-I水平发现:sHLA-I随肝炎活动程度的增加与肝脏HLA-I同步增加,表明肝细胞损伤、细胞内HLA-I分子释放入血是sHLA-I的重要来源。血清sHLA-I可作为反映肝组织免疫水平及肝细胞免疫损伤的指标。(2)测定肝脏或血清HLA-I能在一定程度上了解慢性肝炎患者的肝脏合成储备功能。(3)sHLA-I对机体的免疫系统呈现抑制作用,对探索慢性肝炎免疫耐受状态的形成机制提供了新的角度。(4)目前认为抗-HBe(+)/HBVDNA(+)患者存在乙肝病毒的前C区变异。本实验结果表明变异株病毒较野毒株病毒更能激活机体较高的免疫反应和较强的组织损伤。(5) HLA-I是免疫反应中最后一个环节中的关键分子,检测HLA-I可作为预测肝炎患者预后的直接指标。……   
[关键词]:病毒性肝炎;人白细胞抗原I类分子;sHLA-I;图像分析
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北医科大学2004年
App内打开