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产耐高温纤维素酶细菌的筛选及酶学性质研究

贺芸

  纤维素酶的研究对利用具有巨大潜力的可再生资源——纤维素有重要意义。实验筛选出了产耐高温纤维素酶的细菌菌株,获得了有良好耐热性的纤维素酶,并对筛得的菌株的生理生化特性及所产酶的酶学特性进行了研究。实验利用柴草进行高温堆肥,采样后用半限制性培养基筛选,筛选过程中,用3,5—二硝基水杨酸比色法测量所产纤维素酶活,并通过测不含菌体的发酵液酶活,来判断所产是否为胞外酶,结果筛得一株能产胞外耐高温纤维素酶的菌株。通过菌体观察实验、菌体运动性实验、V-P实验、甲基红实验、淀粉水解实验、过氧化氢酶生成测定实验、碳源利用实验等,对筛得的菌株进行分类鉴定,初步判定其属于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)。利用盐析、凝胶过滤层析等方法对纤维素酶进行分离纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验,电泳结果中出现多条带,而Native—聚丙烯酰胺凝胶电泳结果只显示一条带,初步判定其为多亚基结构,至少有八个亚基。论文研究了该菌所产纤维素酶的最适温度、pH值、稳定性、酶活影响因子及Km值,确定其最适温度在60℃~70℃之间,最适pH值为7.0。用薄层层析的方法,将酶促反应产物与标准样进行比较,鉴定酶促反应产物,结果显示产物主要为葡萄糖。……   
[关键词]:耐高温纤维素酶;嗜热脂肪芽孢杆菌;提纯
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京理工大学2004年