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小鼠黑色素移植瘤模型中血管生成拟态形成的时空变化及其分子机制的初步观察

张凡

  目的:利用小鼠移植瘤模型动态观察血管生成拟态的时空变化以及CD31、MMP2、MMP9、CathepsinD、HMB45在恶性黑色素移植瘤血管生成拟态形成中的作用。方法:1.建模 采用B16黑色素瘤细胞悬液皮下注射法制作小鼠恶性黑色素移植瘤动物模型,同时对动物编号。成瘤后根据随机数字表每天随机抽取一只小鼠处死,共12天,获得肿瘤样本114例。2.染色 肿瘤标本常规固定、包埋,HE染色、CD31、CathepsinD、MMP2、MMP9、HMB45免疫组织化学染色和CD31与PAS双重染色。3.计数方法 显微镜下分别计数肿瘤组织中央区和外周区的高倍视野(×400)下血管生成拟态以及内皮依赖性血管,连续计数10个高倍视野,取其均值分别定义为血管生成拟态密度和内皮依赖性血管密度;血管生成拟态周围及远离血管生成拟态区域肿瘤细胞中阳性细胞百分率;内皮依赖性血管周围及远离内皮依赖性血管区域肿瘤细胞中阳性百分率;连续计数10个高倍视野并取其均值。4.图象及数据处理 利用计算机图象处理软件计算每张切片中的坏死面积比;利用SPSS10.0统计软件对数据进行统计分析,以p<0.05具有统计学意义。结果:在恶性黑色素瘤形成的第1-8天,肿瘤组织内出现图案样PAS染色阳性的管道,其中可见红细胞,同时一部分肿瘤细胞模仿内皮细胞衬复在PAS阳性物质的内表面,形成类似内皮依赖性血管的结构,此即血管生成拟态。该结构在肿瘤中央区和外周区都随时间变化呈现先递增后递减趋势:肿瘤中央区血管生成拟态密度在第1-3天内呈现递增趋势,第4-8天呈现递减趋势;肿瘤外周区血管生成拟态密度在第1-4天呈现递增趋势,在第5-8天呈现递减趋势。两个区域内的血管生成拟态密度比较:在第1-6天内肿瘤中央区高于外周区,在第7-8天肿瘤外周区高于中央区。两个区域内血管生成拟态密度统计学上无明显差别;内皮依赖性血管在肿瘤组织的中央区和外周区呈现递减趋势。比较两个区域内的内皮依赖性血管密度发现:在第1-7天肿瘤中央区内皮依赖性血管密度高于外周区,在第8-12天两个区域内的内皮依赖性血管密天津医科大学硕士研究生毕业论文度无明显差别。统计学分析显示:两个区域内的内皮依赖性血管密度无明显差别。血管生成拟态密度与肿瘤组织的坏死率之间呈密切负相关(r二一0.978,P<O.05);内皮依赖性血管密度与肿瘤组织坏死率之间亦存在负相关(r=一0.230,p(0.05):血管生成拟态周围肿瘤细胞中CD31、HMB45、朋PZ阳性细胞百分率高于远离血管生成拟态区域的阳性细胞百分率;血管生成拟态周围肿瘤细胞Cath即5 inD、MMPg阳性百分率与远离血管生成拟态区域的阳性细胞百分率无差别;内皮依赖性血管周围肿瘤细胞CD31、HMB45、Cath即sinD、咖Pg、MMPZ阳性细胞百分率与远离内皮依赖性血管区域的阳性细胞百分率之间均无差别;血管生成拟态周围肿瘤细胞枷P9阳性细胞百分率高于内皮依赖性血管周围的阳性细胞百分率;血管生成拟态密度与血管生成拟态周围肿瘤细胞CD31、CathepsinD、MMPZ阳性细胞百分率之间存在相关,与肿瘤细胞中HMB45、MMPg阳性细胞百分率之间不存在相关;内皮依赖性血管密度只与内皮依赖性血管周围肿瘤细胞中CD31阳性百分率之间存在相关,与其他指标之间不存在相关。结论:血管生成拟态是肿瘤细胞为适应环境而产生的一种独特的血液供应方式,与内皮依赖性血管并存于肿瘤组织内。恶性黑色素瘤移植瘤中存在血管生成拟态,随肿瘤生长变化而与内皮依赖性血管之间存在一定的时空变化规律。恶性黑色素瘤早期的血液供应中血管生成拟态和内皮依赖性血管共同起作用,在内皮依赖性血管未长入肿瘤组织时,肿瘤中央区的血管生成拟态替代内皮依赖性血管发挥临时性血管作用,肿瘤中央区的血管生成拟态密度高于肿瘤外周区,随着肿瘤的发展内皮依赖性血管长入肿瘤中央区形成完善的血管网并成为主要的肿瘤血液供应方式,血管生成拟态逐渐被内皮依赖性血管所替代。恶性黑色素瘤形成血管生成拟态的过程需要包括组织蛋白酶、基质金属蛋白酶在内的多种蛋白酶类的参与,为其形成提供足够的空间、为细胞在基质中的迁移清扫障碍,血管生成拟态中的基质重塑也需要上述酶类的积极参与。同时血管生成拟态周围肿瘤细胞表面勃附分子的表达也随血管生成拟态的变化而发生改变。CD31、Cathepsino、枷PZ、MMPg、明B45等参与了黑色素瘤血管生成拟态天津医科大学硕士研究生毕业论文的形成,其中CD31、MMPZ作用尤其重要。……   
[关键词]:血管生成拟态;肿瘤血管生成;细胞勃附分子;恶性黑色素瘤;基质金属蛋白酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:天津医科大学2004年
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